本文關(guān)鍵詞：中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白激發(fā)小鼠過(guò)敏反應(yīng)及其機(jī)理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：對(duì)蝦等水產(chǎn)品食用蛋白的致敏性對(duì)食用者的安全健康存在著潛在的威脅,而致敏性的高低主要取決于食用蛋白中過(guò)敏原的種類(lèi)以及含量。對(duì)于易過(guò)敏人群而言,食用對(duì)蝦等富含過(guò)敏原的食物易引發(fā)全身性過(guò)敏反應(yīng),出現(xiàn)腸道黏膜過(guò)敏癥狀以及體內(nèi)一些生理指標(biāo)的變化。鑒于此,本研究擬以具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值的特色物種中國(guó)對(duì)蝦為對(duì)象,建立腹腔注射該蝦肌肉蛋白的ICR小鼠過(guò)敏模型,結(jié)合間接ELISA測(cè)定小鼠血清中過(guò)敏原特異性IGE抗體水平以驗(yàn)證過(guò)敏模型的成功建立,通過(guò)HE/甲苯胺藍(lán)染色以及免疫組化等手段探討該蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠腸道黏膜免疫的機(jī)理,最后通過(guò)測(cè)定小鼠相關(guān)臟器比重、抗氧化酶活性以及過(guò)敏指示酶的變化,表明了機(jī)體內(nèi)發(fā)生過(guò)敏的過(guò)程與一些生理指標(biāo)變化的相關(guān)性。本研究旨在為中國(guó)對(duì)蝦的攝入性過(guò)敏及體內(nèi)相關(guān)的免疫調(diào)控提供相關(guān)理論依據(jù),同時(shí)對(duì)于臨床評(píng)估中國(guó)對(duì)蝦過(guò)敏原的潛在致敏性具有一定的實(shí)際參考意義。主要研究結(jié)果如下： 1、采用腹腔免疫中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白方法,建立針對(duì)該蝦蛋白過(guò)敏的ICR小鼠模型。通過(guò)SDS-PAGE電泳和AlphaView SA3.4.0電泳圖像分析軟件分析,初步推測(cè)了中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白中可能含有的過(guò)敏原種類(lèi)；建立小鼠過(guò)敏模型之后,采用間接ELISA方法檢測(cè)小鼠血清中過(guò)敏原特異性IgE水平在激發(fā)期不同時(shí)間點(diǎn)的變化,并通過(guò)各劑量組OD值和對(duì)照組OD值的橫向比較,結(jié)果大多為2.1倍以上,證明該模型已經(jīng)成功建立,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。 2、采用各染色方法及免疫組化方法探討中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠腸道黏膜免疫的機(jī)理。通過(guò)HE染色對(duì)小腸腸道形態(tài)學(xué)觀察初步證明了蝦蛋白致敏組小鼠腸道發(fā)生炎癥且導(dǎo)致上皮損傷；對(duì)小腸肥大細(xì)胞進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色發(fā)現(xiàn),蝦蛋白致敏組小鼠腸道肥大細(xì)胞發(fā)生了嚴(yán)重的脫顆�，F(xiàn)象,細(xì)胞完整率顯著降低；免疫組化檢測(cè)小腸中相關(guān)T細(xì)胞(CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞)以及IgA+漿細(xì)胞的數(shù)量,結(jié)果顯示該蝦蛋白致敏個(gè)體內(nèi)小腸內(nèi)這些細(xì)胞陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組；提示蝦肌肉蛋白引發(fā)腸道黏膜免疫反應(yīng)是通過(guò)IgE介導(dǎo)的速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)以及T淋巴細(xì)胞依賴(lài)性延遲型過(guò)敏反應(yīng)協(xié)同作用,并伴有B淋巴細(xì)胞向IgA+漿細(xì)胞持續(xù)分化來(lái)實(shí)現(xiàn)。 3、研究中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白引發(fā)小鼠體內(nèi)相關(guān)臟器比重及酶的變化。采用酶活試劑盒測(cè)定抗氧化酶(SOD、POD、CAT、GSH-Px、 GST)和NOS/iNOS活性；使用雙抗夾心ELISA方法檢測(cè)PLA2的濃度；對(duì)Ca2+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量的檢測(cè)采用RT-PCR方法。對(duì)各蝦蛋白劑量組和對(duì)照組小鼠肝臟、腎臟、脾臟比重比較發(fā)現(xiàn),蝦蛋白致敏組小鼠肝、腎發(fā)生了不同程度的萎縮,且隨著注射劑量加大而萎縮程度越嚴(yán)重,而脾臟則發(fā)生腫大,且隨著注射劑量加大而腫大程度越嚴(yán)重；通過(guò)測(cè)定小鼠肝、腎、脾及血清中這幾種抗氧化酶的活性發(fā)現(xiàn),蝦蛋白致敏組個(gè)體內(nèi)這些酶的活性明顯升高；而測(cè)定小鼠體內(nèi)肝、腎、脾和/或血清中三種過(guò)敏特征酶的變化發(fā)現(xiàn),蝦蛋白致敏組個(gè)體內(nèi)肝、腎、脾及血清中NOS/iNOS活性明顯提高、PLA2濃度顯著增加,而肝臟、腎臟、脾臟內(nèi)Ca2+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量下降；提示過(guò)敏的發(fā)生過(guò)程與機(jī)體內(nèi)臟器比重、抗氧化酶的活性、NOS/iNOS活性、PLA2濃度以及Ca2+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量均有一定的相關(guān)性,這些生理指標(biāo)可通過(guò)與機(jī)體內(nèi)其他相關(guān)免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子的相互作用,啟動(dòng)機(jī)體內(nèi)相關(guān)的免疫應(yīng)答。
【關(guān)鍵詞】：中國(guó)對(duì)蝦 肌肉蛋白 ICR小鼠 過(guò)敏反應(yīng) 黏膜免疫 酶
【學(xué)位授予單位】：浙江工商大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-14
• 第一章 文章綜述14-32
• 1 食物過(guò)敏反應(yīng)和作用機(jī)制14-26
• 1.1 食物過(guò)敏和食物過(guò)敏原14-17
• 1.1.1 食物過(guò)敏14-15
• 1.1.2 食物過(guò)敏的流行病學(xué)15-16
• 1.1.3 食物過(guò)敏原16-17
• 1.2 食物過(guò)敏的作用機(jī)制17-22
• 1.2.1 食物過(guò)敏的一般致敏機(jī)制18-19
• 1.2.2 食物過(guò)敏的分子致敏機(jī)制以及免疫調(diào)控19-22
• 1.3 動(dòng)物模型22-24
• 1.4 食物過(guò)敏原的檢測(cè)技術(shù)24-26
• 1.4.1 體內(nèi)檢測(cè)技術(shù)24
• 1.4.2 體外檢測(cè)技術(shù)24-25
• 1.4.3 食物過(guò)敏原檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展前景25-26
• 2 甲殼類(lèi)水產(chǎn)過(guò)敏原的種類(lèi)及其研究進(jìn)展26-30
• 2.1 甲殼類(lèi)過(guò)敏原的種類(lèi)26-29
• 2.1.1 原肌球蛋白(TM)27
• 2.1.2 精氨酸激酶(AK)27
• 2.1.3 肌球蛋白輕鏈(MLC)27-28
• 2.1.4 肌鈣結(jié)合蛋白(SCP)28
• 2.1.5 血藍(lán)蛋白亞基(HCS)28-29
• 2.1.6 磷酸丙糖異構(gòu)酶蛋白(TPI)29
• 2.2 國(guó)外研究進(jìn)展29-30
• 2.3 國(guó)內(nèi)研究進(jìn)展30
• 3 本研究的目的、內(nèi)容和意義30-32
• 3.1 研究的目的及意義30-31
• 3.2 研究的技術(shù)路線31-32
• 第二章 中國(guó)對(duì)蝦蛋白制備以及對(duì)ICR小鼠過(guò)敏模型的建立32-44
• 1 前言32
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法32-40
• 2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象32-33
• 2.2 主要試劑33
• 2.3 主要儀器設(shè)備33-34
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法34-40
• 2.4.1 蝦蛋白浸液的制備34-36
• 2.4.1.1 蛋白質(zhì)提取34
• 2.4.1.2 蛋白含量測(cè)定34-36
• 2.4.2 蛋白SDS-PAGE電泳36-38
• 2.4.2.1 相關(guān)溶液配置36-37
• 2.4.2.2 SDS-PAGE凝膠配制37
• 2.4.2.3 SDS-PAGE蛋白樣品的制備37
• 2.4.2.4 SDS-PAGE電泳步驟37
• 2.4.2.5 染色、脫色37-38
• 2.4.2.6 圖像的掃描與分析38
• 2.4.3 蝦蛋白ICR小鼠過(guò)敏模型的建立38-40
• 2.4.3.1 ICR小鼠分組及喂養(yǎng)38
• 2.4.3.2 免疫方案38
• 2.4.3.3 小鼠血清中特異性IgE的測(cè)定38-40
• 3 結(jié)果與分析40-42
• 3.1 蛋白的SDS-PAGE分析40
• 3.2 小鼠血清中特異性sIgE的檢測(cè)結(jié)果40-42
• 4 討論42-43
• 5 本章小結(jié)43-44
• 第三章 中國(guó)對(duì)蝦蛋白誘導(dǎo)ICR小鼠腸道黏膜過(guò)敏反應(yīng)的機(jī)制研究44-55
• 1 前言44-45
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法45-48
• 2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象45
• 2.2 主要試劑45
• 2.3 主要儀器設(shè)備45-46
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法46-48
• 2.4.1 取材及標(biāo)本處理46
• 2.4.2 小鼠腸道形態(tài)學(xué)觀察46-47
• 2.4.3 小腸肥大細(xì)胞完整率47
• 2.4.4 小鼠小腸絨毛相關(guān)T細(xì)胞和固有層漿細(xì)胞檢測(cè)47-48
• 3 結(jié)果與分析48-52
• 3.1 小鼠腸道的形態(tài)學(xué)觀察48-49
• 3.2 小腸肥大細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察以及完整率49-50
• 3.3 小鼠小腸絨毛相關(guān)T細(xì)胞及固有層IgA~+漿細(xì)胞檢測(cè)50-52
• 3.3.1 小腸絨毛T細(xì)胞及固有層漿細(xì)胞觀察50-52
• 3.3.2 陽(yáng)性T細(xì)胞及IgA~+漿細(xì)胞計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理52
• 4 討論52-54
• 5 本章小結(jié)54-55
• 第四章 中國(guó)對(duì)蝦蛋白引發(fā)ICR小鼠體內(nèi)臟器比重和相關(guān)酶的變化55-72
• 1 前言55-56
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法56-61
• 2.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象56
• 2.2 主要試劑56
• 2.3 主要儀器設(shè)備56-57
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法57-61
• 2.4.1 取材及樣本處理57
• 2.4.2 小鼠體內(nèi)不同臟器比重的測(cè)定57
• 2.4.3 小鼠體內(nèi)不同組織及血清中相關(guān)抗氧化酶的測(cè)定57-58
• 2.4.3.1 組織和血清中SOD、POD、CAT的活性測(cè)定57-58
• 2.4.3.2 組織和血清中GSH-Px、GST的活性測(cè)定58
• 2.4.4 小鼠體內(nèi)不同組織及血清中過(guò)敏特征酶的測(cè)定58-61
• 2.4.4.1 組織和血清中NOS/iNOS的活性測(cè)定58
• 2.4.4.2 組織和血清中PLA_2的濃度測(cè)定58-59
• 2.4.4.3 組織中Ca~(2+)-ATPase相對(duì)表達(dá)量測(cè)定59-61
• 3 結(jié)果與分析61-69
• 3.1 小鼠體內(nèi)不同組織的臟器指數(shù)比較61-62
• 3.2 小鼠體內(nèi)不同組織及血清中相關(guān)抗氧化酶的活性變化62-65
• 3.2.1 組織和血清中SOD、POD、CAT的活性變化62-64
• 3.2.2 組織和血清中GSH-Px、GST的活性變化64-65
• 3.3 小鼠體內(nèi)不同組織和血清中過(guò)敏特征酶變化65-69
• 3.3.1 組織和血清中NOS/iNOS的活性變化65-66
• 3.3.2 組織和血清中PLA_2的濃度變化66-67
• 3.3.3 組織中Ca~(2+)-ATPase相對(duì)表達(dá)量變化67-69
• 4 討論69-70
• 5 本章小結(jié)70-72
• 第五章 總結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及研究展望72-75
• 1 總結(jié)論72-73
• 2 創(chuàng)新點(diǎn)73
• 3 研究展望73-75
• 參考文獻(xiàn)75-83
• 附錄 縮略詞中英文對(duì)照表83-85
• 碩士期間完成的論文85-86
• 致謝86-87

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：中國(guó)對(duì)蝦肌肉蛋白激發(fā)小鼠過(guò)敏反應(yīng)及其機(jī)理研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：266513