發(fā)布時間：2020-05-10 17:53

【摘要】： 近年來，胚胎干細胞(ES cells)以其具有全能性、可操作性和可塑性等諸多優(yōu)點，已經成為醫(yī)學和生命科學領域研究的熱點之一。研究者們試圖用ES細胞建立糖尿病、老年型癡呆、帕金森氏癥等遺傳疾病轉基因動物模型。在這些研究中，最關鍵的是ES細胞的來源和定向誘導分化問題。進行一系列研究必須要有足夠的ES細胞，特別是建立轉基因動物模型，需要10代以內的ES細胞；而用作細胞治療研究也必須解決其他分化細胞的影響問題。 在我們的實驗中，以小鼠ES—D3細胞系為對象，通過細胞培養(yǎng)大量增殖未分化細胞，再用兩種方法進行ES細胞向神經細胞的誘導分化實驗。首先從胚體(EBs)本身探討ES細胞內部調控誘導分化的機制，用懸浮培養(yǎng)、懸滴培養(yǎng)、懸浮轉懸滴培養(yǎng)的方法培養(yǎng)出不同時間的EBs，再加以RA處理，觀察比較EBs對ES細胞神經分化的影響；在此基礎上，用不同濃度的RA處理EBs，分析誘導劑RA對ES細胞神經分化的影響。結果表明，用10~(-6)M的RA處理懸滴培養(yǎng)3d轉懸浮培養(yǎng)1d的EBs 4d，能得到較高的神經分化比例。 同時，為以后開展轉基因動物模型的研究，我們還進行了小鼠ES細胞建系的部分工作。以ICR小鼠和昆明小鼠為實驗對象，采用超數排卵的方法獲得小鼠胚胎，培養(yǎng)在用絲裂霉素C處理過的ICR小鼠和昆明小鼠MEF細胞飼養(yǎng)層上，選取適當時間離散增殖的ICM和類ES細胞集落，分析了在小鼠ES細胞建系過程中，飼養(yǎng)層細胞、消化液及不同品系來源的胚胎的影響。從實驗結果來看，ICR小鼠和昆明小鼠兩種來源的飼養(yǎng)層細胞對胚胎貼壁、ICM增殖無影響，，消化液作用影響明顯，以0.125％trypsin+0.02％EDTA消化10～15min為宜。以上結果表明：ICR小鼠比昆明小鼠更易進行ES細胞的建系工作。
【圖文】：

的形態(tài)要好(圖2)，ES細胞呈集落狀或島嶼狀生長，邊緣清楚，結構致密，細胞之間界限部清楚。當撤去LIF及沒有MEF細胞作飼養(yǎng)層的情況下，ES細胞就自發(fā)形成胚體(EBs)。用懸浮或懸滴不同培養(yǎng)方式得到的EBs(圖3)分別用含1x10--‘mol/LRA的培養(yǎng)基培養(yǎng)4d，然后撤去RA，換用常規(guī)的ES培養(yǎng)基，24h后就開始分化(圖4)，EBs外圍逐漸出現(xiàn)成纖維細胞、扁平上皮細胞和神經元樣細胞(當突起長度超過胞體直徑的5倍時就判定為神經元樣細胞[湯富酬，2001】)(圖5)，同時有細胞凋亡現(xiàn)象。繼續(xù)培養(yǎng)，神經元樣細胞l旬形成網絡樣結構(圖5)。圖2ES細胞(a)長在MEF滋養(yǎng)層細胞上的ES細

Fig.4分化中的EBsDifferentiatingEBs
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

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本文編號：2657670