【摘要】：目的 探討大鼠精原細胞的分離純化及雙酚A對精原細胞活力和結構的影響。方法 三種酶兩步消化法制備10dWister大鼠睪丸的單細胞懸液;Percoll不連續(xù)密度梯度分離精原細胞;用貼壁速度的差異純化精原細胞。光電鏡觀察精原細胞的形態(tài)結構特征;應用c-kit免疫細胞化學鑒定精原細胞。苔盼藍計數(shù)法探討不同劑量組雙酚A(1×10~(-4)mol/L、1×10~(-5)mol/L、1×10~(-6)mol/L、1×10~(-7)mol/L)對離體培養(yǎng)精原細胞活力的影響;吉姆莎染色觀察不同劑量組雙酚A對離體培養(yǎng)精原細胞形態(tài)結構的改變。結果 精原細胞主要分布于28%～36%(Ⅱ帶)間的Percoll梯度;分離純化的精原細胞形態(tài)結構與組織切片上精原細胞的形態(tài)結構一致,其純度達55.68%;c-kit在精原細胞呈陽性表達,在睪丸其他細胞呈弱陽性或陰性表達。雙酚A可降低離體培養(yǎng)精原細胞活力,增加精原細胞核固縮數(shù)量,改變精原細胞的形態(tài)結構。結論 利用三種酶兩步消化法、Percoll不連續(xù)密度梯度及體外培養(yǎng)貼壁速度的差異分離純化的精原細胞滿足體外實驗要求;精原細胞表達特異的c-kit受體。雙酚A對精原細胞有直接的細胞毒性作用。
【圖文】：

時間(天)圖4隨著時間的延長各劑量組對離體培養(yǎng)精原細胞活力的影響結果表明:隨著時間的延長，各劑量組均可降低離體培養(yǎng)精原細活力:與正常對照組比較，雙酚A各劑量組隨劑量增加，對離體培原細胞活力影響越大。

離體培養(yǎng)的精原細胞散在或成堆成串:單個精原細胞胞體大，圓形;胞質少;核大成圓形，可見1一3個核仁;存在凋亡細胞離體培養(yǎng)的精原細胞成堆成串或散在;單個精原細胞胞體大圓形，胞質少，核大圓形或橢圓形，可見1~3個核仁;凋亡細胞少。圖16雙酚A(低劑量)組(Giemsa)10X100離體培養(yǎng)的精原細胞散在或成串成堆;部分細胞可見細胞間橋;多數(shù)細胞形態(tài)同正常對照組;少部分細胞胞體縮小，核固縮，核仁不明顯。圖17雙酚A(中劑量)組(Giemsa)10X100離體培養(yǎng)的精原細胞散在或成堆成串，形態(tài)同正常對照組;部分細胞胞體縮小，胞膜皺縮，核固縮，核仁不明顯;部分細胞胞漿內可見嗜堿性顆粒。
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R329.2

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本文編號：2641023