本文關鍵詞：Gas7在大鼠隔區(qū)發(fā)育過程中的表達，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究大鼠發(fā)育過程中,隔區(qū)生長休止蛋白7(Growth arrest-specific protein7,Gas7)的表達,探討Gas7在大鼠隔區(qū)發(fā)育過程中可能的生物學功能,為大鼠隔區(qū)的發(fā)生發(fā)育提供可能的分子生物學資料。方法:成年SD大鼠60只,雌雄各半,將雌雄大鼠于當日18:00時按1:1合籠,次日中午檢測有陰栓者,定為胚胎期第0.5天(E0.5)。根據(jù)大鼠隔區(qū)發(fā)生和發(fā)育的特點,選取E16.5、E20.5、P0(出生當天)、P7、P14、P21和Adult(2月齡)共7組不同發(fā)育時期大鼠,每組隨機選取18只,共126只大鼠用于實驗;其中每組分別取6只大鼠,應用RT-PCR方法、Western blot方法和免疫組織化學方法觀察發(fā)育不同階段大鼠隔區(qū)Gas7的表達及定位。結果:1.RT-PCR實驗結果:在E16.5時Gas7表達最弱,其后逐漸增強,至P21時達到高峰,Adult又有所減弱。2.Western blot實驗結果:Gas7蛋白表達趨勢與RT-PCR實驗結果相同。3.免疫組化實驗結果:○1外側隔核(LS):在E16.5、E20.5和P0時均未見典型形態(tài)的陽性神經元,Gas7陽性產物呈絮狀或斑片狀,P7時出現(xiàn)陽性神經元,由P7至P21陽性神經元數(shù)量逐步遞增,且相鄰時間點間有顯著差異(P0.05),成年較P21細胞數(shù)減少(P0.05);由E16.5至P21染色逐漸加深、平均灰度值逐漸減小,相鄰時間點間差異顯著(P0.05)�！�2內側隔核(MS):在E16.5和E20.5時Gas7免疫陽性產物呈絮狀或斑片狀,Gas7陽性神經元出現(xiàn)于P0,此后,其細胞數(shù)量遞增和平均灰度值遞減的趨勢與LS相同�！�3斜角帶核(DB):斜角帶核水平支(HDB)陽性神經元出現(xiàn)的時間,數(shù)量和平均灰度值的變化趨勢與MS一致;斜角帶核垂直支(VDB)陽性神經元自P0出現(xiàn)后逐步遞增,至P14達到高峰,P21和成年均有所減少,平均灰度值由E16.5開始遞減,至P14達到最低,隨后又逐步升高,相鄰時間點間均有顯著差異(P0.05)。提示Gas7可能參與了隔區(qū)大部分發(fā)育過程的調節(jié)。○4傘隔核(SFI)和三角隔核(TS):由E16.5至成年,均不見具有典型形態(tài)的Gas7陽性神經元。結論:1.在大鼠隔區(qū)發(fā)育的過程中,Gas7基因核酸和蛋白的表達具有時間和空間上的特異性,這種特異性與隔區(qū)神經元的發(fā)育和成熟相關,提示Gas7可能參與了大鼠隔區(qū)亞細胞核團的發(fā)育過程。2.Gas7陽性神經元在隔區(qū)大部分核團出現(xiàn)的時間不一致,數(shù)量和平均灰度值到達高峰和低谷的時間點不同。這種表達上的差異可能與隔區(qū)亞細胞核團本身的發(fā)育特點有關,同時也說明Gas7對隔區(qū)不同核團的發(fā)育,其調控作用可能不同。3.LS、MS和DB與認知和記憶相關,SFI和TS與情緒及疼痛有關。結合各核團Gas7免疫組化結果推測,Gas7在參與隔區(qū)各核團發(fā)育的過程中,可能主要調節(jié)具有認知和記憶功能的部分核團,提示Gas7可能對大鼠隔區(qū)認知和記憶功能的形成有影響。
【關鍵詞】：生長休止蛋白7 發(fā)育 隔區(qū) 大鼠 免疫印跡 逆轉錄聚合酶鏈反應 免疫組化
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R338
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 研究內容與方法13-29
• 1 實驗材料13-16
• 1.1 實驗動物13
• 1.2 實驗儀器13-14
• 1.3 實驗試劑14-16
• 2 實驗方法16-28
• 2.1 標本收集16-17
• 2.2 RT-PCR方法檢測各時期隔區(qū)Gas7 mRNA的表達17-21
• 2.3 Western blot檢測各時期隔區(qū)Gas7蛋白的表達21-26
• 2.4 尼氏染色和免疫組織化學染色觀察Gas7蛋白在不同時期隔區(qū)的組織學定位26-28
• 3 統(tǒng)計處理與分析28
• 4 實驗技術路線圖28-29
• 結果29-40
• 1 RT-PCR方法檢測各時期隔區(qū)Gas7 mRNA的表達29-31
• 1.1 各組不同時期大鼠隔區(qū)RNA的質量檢測29
• 1.2 RT-PCR結果29-31
• 2 Western blot方法檢測各時期隔區(qū)Gas7蛋白的表達31-33
• 3 Gas7蛋白在大鼠隔區(qū)不同發(fā)育時期中的組織學定位33-40
• 3.1 Nissl染色結果33-34
• 3.2 Gas7免疫組織化學染色結果34-40
• 討論40-46
• 1 隔區(qū)各核團的發(fā)育40-42
• 2 Gas7在隔區(qū)各核團發(fā)育過程中的表達及其生物學功能42-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-53
• 綜述53-66
• 參考文獻60-66
• 附錄66-87
• 作者簡介（學習及工作經歷、發(fā)表的學位文章）87-88
• 致謝88

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本文編號：264030