【摘要】：背景與目的：丙型肝炎是一種流行較為廣泛的病毒性疾病，是一個(gè)對(duì)社會(huì)及經(jīng)濟(jì)有重要影響的全球問(wèn)題。據(jù)估計(jì)，，全球有1.7億人口，即全世界3％左右的人口感染了丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)(世界衛(wèi)生組織)。HCV歸屬黃病毒科(Flaviviridae family)的嗜肝病毒屬，與其他RNA病毒一樣，HCV在復(fù)制過(guò)程中由于缺乏有效的修復(fù)機(jī)制，故易發(fā)生變異，逃避宿主免疫監(jiān)視，因無(wú)有效疫苗，其感染率呈上升趨勢(shì)。按其基因組序列異質(zhì)性程度高低可分基因型(30％)、亞型(20％)及分離株(10％)。不同的基因型其慢性化程度及對(duì)干擾素的反應(yīng)等也不盡相同。目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)HCV常用免疫學(xué)方法和PCR方法，前者檢測(cè)靈敏度有一定的局限性，如血清中抗原濃度過(guò)低或抗體尚未產(chǎn)生(即“窗口期”)會(huì)檢測(cè)不出，若想診斷出大量基因型，此方法更顯得無(wú)力；PCR方法檢測(cè)雖可以縮短“窗口期”，但對(duì)基因型的檢測(cè)不僅操作煩瑣、費(fèi)時(shí)，且很難實(shí)現(xiàn)。本研究目的在于研制一種DNA芯片，通過(guò)雜交，尼龍膜顯色方法，達(dá)到快速、經(jīng)濟(jì)、靈敏、準(zhǔn)確檢測(cè)HCV及其基因型的目的。 方法：本研究采取的方法是依據(jù)基因型的核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的探針，然后將合成好的寡核苷酸探針用點(diǎn)樣儀點(diǎn)于玻璃片表面，制成DNA芯片，通過(guò)雜交，尼龍膜顯色方法進(jìn)行檢測(cè)HCV及其基因型。 首先，構(gòu)建了7個(gè)含丙型肝炎基因型的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，包括1a、1b、2a、2b、3a、3b、6a。以這些標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒作為實(shí)驗(yàn)的材料及參照。 根據(jù)HCV 5′端非編碼區(qū)(5′N(xiāo)CR)設(shè)計(jì)特異型探針和引物，制作DNA芯片。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們對(duì)PCR條件、雜交條件以及顯色條件等進(jìn)行了優(yōu)化。 實(shí)驗(yàn)組為60份HCV RNA陽(yáng)性血清，對(duì)照組為20份健康人血清。獲得目的片 鄭州大學(xué)2004屆碩士學(xué)位論文 段后與芯片雜交，最后通過(guò)尼龍膜上的顯色信息判讀基因型。同時(shí)以測(cè)序法進(jìn)行雙 盲HCV基因分型對(duì)照檢測(cè)。 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組HCV芯片檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，對(duì)照組均為陰性。實(shí)驗(yàn)組基因分型 檢測(cè)結(jié)果與測(cè)序結(jié)果二者符合率為%.7%。 結(jié)論:表明用基于膜顯色結(jié)果判讀的DNA芯片來(lái)檢測(cè)HCV基因分型具有快 速、經(jīng)濟(jì)、高特異性和高靈敏度的特性，可以應(yīng)用于HCV及其基因分型臨床檢測(cè)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 施錦杰;基因芯片技術(shù)在病毒性肝炎檢測(cè)中的應(yīng)用與展望[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè));2002年04期

2 陸志檬，張東華，童葵塘，高健，白敬羽，徐伯忠;HCV基因型和病毒量與干擾素療效的關(guān)系[J];中華傳染病雜志;1995年02期

3 鄭懷競(jìng);生物芯片技術(shù)在病毒性肝炎診斷中的應(yīng)用[J];中華肝臟病雜志;2002年04期

本文編號(hào)：2636062