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人源胸腺素原—白介素融合蛋白基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建

發(fā)布時(shí)間:2020-04-20 09:41
【摘要】:人源胸腺素α原(Human prothymosinα,ProTα)是一個(gè)在體內(nèi)分布廣泛,進(jìn)化上高度保守的強(qiáng)酸性蛋白質(zhì),ProTα作為免疫調(diào)節(jié)因子具有多種生理功能,其相對(duì)分子量為1.3×104Da,基因定位于第二號(hào)染色體上,目前已有6個(gè)亞家族成員被克隆和測(cè)序。其中高加索人種的ProTα基因,表達(dá)產(chǎn)物已作為抗腫瘤的一種生物制品已進(jìn)入了臨床驗(yàn)證階段。 白介素2(interleukin 2,IL-2)從前被認(rèn)為是一種T細(xì)胞生長因子,它是由凝集素刺激或者被抗原激活的T細(xì)胞所產(chǎn)生有效的免疫調(diào)節(jié)因子。IL-2基因定位于人的第四條染色體上,分子量為1.5×104Da。IL-2不僅可以由受刺激的T細(xì)胞細(xì)胞產(chǎn)生,而且可以由某些T淋巴瘤細(xì)胞系產(chǎn)生。IL-2對(duì)于研究T細(xì)胞分化和產(chǎn)生時(shí)候的分子的特性具有重要的作用。它提高了自然殺傷細(xì)胞的活性,,可以用于治療癌癥。但是過度使用IL-2會(huì)帶來不良反應(yīng)。 IL-2和 ProTα協(xié)同作用于自體腫瘤的反應(yīng)比單獨(dú)使用IL-2所引起的反應(yīng)要強(qiáng)一些。IL-2和ProTα的聯(lián)合使用不僅能降低單獨(dú)使用IL-2產(chǎn)生的毒副作用,而且還能夠提高抗腫瘤的效果。 根據(jù)GenBank上發(fā)表的ProTα和IL-2序列,設(shè)計(jì)了兩對(duì)特異引物通過RT-PCR的方法分別從人T淋巴細(xì)胞和人HL-60白血病細(xì)胞的總RNA中擴(kuò)增出ProTα和IL-2基因,然后再設(shè)計(jì)帶有連接子的引物把兩個(gè)單獨(dú)的基因連接成為一個(gè)融合基因 ProTα-IL-2。把 ProTα和 ProTα-IL-2分別克隆到質(zhì)粒pcDNA3.1(-)上,構(gòu)建成真核表達(dá)載體。分別對(duì) ProTα和 ProTα-IL-2測(cè)序,測(cè)序結(jié)果基本上與Genbank上發(fā)表的序列一致。
【圖文】:

人源胸腺素原—白介素融合蛋白基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建


IL-2的PCR產(chǎn)物Fig1IL-2PCRproduct

人源胸腺素原—白介素融合蛋白基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建


胸腺素α原的PCR產(chǎn)物Fig2ProTαPCRproduct
【學(xué)位授予單位】:廣西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2004
【分類號(hào)】:R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張符光,劉佃辛,宋農(nóng),王新為,張兆山,馬清鈞;人胸腺素α原cDNA的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);1996年04期



本文編號(hào):2634412

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