本文關(guān)鍵詞：B群流腦新疫苗候選抗原NMB0315免疫效果的初步評(píng)價(jià)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]研究原核重組表達(dá)的B群腦膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(r NMB0315)在誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答中的作用、免疫血清抗體體外殺菌活性和重組蛋白的免疫保護(hù)效果,初步評(píng)價(jià)r NMB0315作為B群流腦疫苗候選抗原的潛力。[方法]以B群腦膜炎奈瑟菌標(biāo)準(zhǔn)株MC58基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增NMB0315基因,克隆至p ET-30a原核表達(dá)載體中,經(jīng)Bam H I和Xho I雙酶切及測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒。將構(gòu)建成功的原核重組表達(dá)載體p ET-30a/NMB0315轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21中大量表達(dá)重組蛋白,經(jīng)His親和層析純化重組蛋白,Western-blot鑒定其抗原性,反相高效液相色譜法(RP-HPLC)分析r NMB0315蛋白的純度。純化鑒定后的重組蛋白經(jīng)腹腔注射免疫雌性BALB/c小鼠,采用間接ELISA法檢測(cè)蛋白疫苗免疫小鼠血清中抗NMB0315特異性總Ig G及其亞類抗體水平、小鼠生殖道黏膜分泌物中抗NMB0315特異性s Ig A抗體水平及經(jīng)r NMB0315刺激后小鼠脾淋巴細(xì)胞上清液中IFN-γ、IL-4水平,CCK8法檢測(cè)小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖刺激指數(shù)(SI);按一定比列混合乳兔補(bǔ)體、免疫血清及生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期的MC58菌液,測(cè)定免疫血清體外殺菌效價(jià);觀察NMB0315重組蛋白疫苗對(duì)感染B群腦膜炎奈瑟菌雌性BALB/c小鼠的免疫保護(hù)效果。[結(jié)果]成功構(gòu)建了原核表達(dá)重組載體p ET-30a/NMB0315。r NMB0315蛋白能在培養(yǎng)上清中以可溶性狀態(tài)表達(dá)。r NMB0315具有良好的免疫原性,能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高水平的體液免疫應(yīng)答:包括血清特異性Ig G、Ig G1、Ig G2a、Ig G3、Ig G2b和生殖道黏膜特異性s Ig A,免疫后第6周抗體效價(jià)分別為1:150,000、1:85,000、1:60,000、1:35,000、1:30,000和1:30,000;在r NMB0315免疫的2、4、6周,血清Ig G2a/Ig G1的比值分別為0.673,0.810,0.685,比值均小于1。r NMB0315也能誘導(dǎo)產(chǎn)生較高水平的細(xì)胞免疫應(yīng)答,疫苗免疫第6周,小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)SI值(1.56±0.056)明顯高于PBS(0.146±0.032)、FA(0.310±0.044)對(duì)照組(P0.001)。與反映體液免疫有關(guān)的細(xì)胞因子IL-4(210.86pg/m L)和反映細(xì)胞免疫有關(guān)的細(xì)胞因子IFN-γ(157.59pg/m L)的水平,FA+r NMB0315組均明顯高于PBS、FA(Freund adjuvant,FA)對(duì)照組(P0.001)。r NMB0315疫苗免疫血清在補(bǔ)體介導(dǎo)下的體外殺菌抗體效價(jià)為1:128,72小時(shí)內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠的免疫保護(hù)率為90%。[結(jié)論]1.原核表達(dá)的r NMB0315具有良好的免疫原性,能誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)小鼠產(chǎn)生高水平的體液免疫和細(xì)胞免疫,且以Th2傾向性體液免疫應(yīng)答為主;也能誘導(dǎo)生殖道黏膜局部產(chǎn)生較高水平的特異性s Ig A抗體。2.r NMB0315疫苗對(duì)感染B群腦膜炎奈瑟菌的BALB/c小鼠具有良好的免疫保護(hù)效果;在補(bǔ)體介導(dǎo)下,末次免疫血清在體外具有較強(qiáng)的殺菌活性。
【關(guān)鍵詞】：B群腦膜炎奈瑟菌 外膜蛋白NMB0315 重組蛋白疫苗 免疫活性 免疫保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392-33
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮略語(yǔ)索引10-12
• 第1章 緒論12-14
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 2.1 主要的實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 2.2 菌株、質(zhì)粒及試劑15-18
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法18-32
• 3.1 原核重組載體的構(gòu)建及鑒定18-24
• 3.2 重組蛋白NMB0315的表達(dá)、純化鑒定24-27
• 3.3 B群腦膜炎奈瑟菌NMB0315蛋白疫苗的免疫保護(hù)作用27-30
• 3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法30-32
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-48
• 4.1 原核表達(dá)載體pET-30a/NMB0315的構(gòu)建及鑒定32-34
• 4.2 p ET-30a/NMB0315重組質(zhì)粒的表達(dá)及純化34-36
• 4.3 rNMB0315蛋白疫苗免疫活性評(píng)價(jià)36-45
• 4.4 rNMB0315 蛋白疫苗的免疫保護(hù)效果和免疫血清體外殺菌活性45-48
• 第5章 討論48-52
• 第6章 結(jié)論52-54
• 參考文獻(xiàn)54-60
• 文獻(xiàn)綜述 160-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 文獻(xiàn)綜述 268-78
• 參考文獻(xiàn)73-78
• 附錄78-82
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果82-84
• 基金項(xiàng)目84-86
• 致謝86

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 謝梅花;李開銘;胡四海;;B群腦膜炎奈瑟菌外膜蛋白作為疫苗候選抗原的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2014年06期

  本文關(guān)鍵詞：B群流腦新疫苗候選抗原NMB0315免疫效果的初步評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：263238