發(fā)布時間：2020-04-10 15:39

【摘要】：補體系統(tǒng)在抵抗微生物感染的天然免疫防御中起著重要作用，然而，補體異常(包括程度和部位)活化也參與許多疾病的發(fā)生和發(fā)展。臨床資料已證明許多疾病均與補體介導的炎癥有關。因此，抗補體治療一直是補體學研究中的重要領域之一。人們先后嘗試了許多抑制補體激活的方法，但迄今尚無真正能夠應用于臨床的抗補體藥物。 本課題組另辟蹊徑，選擇補體經(jīng)典激活途徑始動分子C1q為靶標，利用噬菌體肽庫技術，研究可抑制補體激活的C1qR模擬肽。以C1q為釣餌蛋白，親和篩選噬菌體線性十二肽庫并經(jīng)初步鑒定，獲得一批結(jié)合C1q的噬菌體克隆。本實驗對之進一步研究，包括以下三個部分。 一、C1q結(jié)合性噬菌體克隆的系統(tǒng)鑒定 采用U937細胞配體結(jié)合抑制實驗和AIgG競爭抑制實驗，從結(jié)合C1q的噬菌體克隆中，篩選到14個強陽性克隆。從其展示肽DNA測序結(jié)果推導氨基酸順序，得到9個序列(2個相同序列，4個沒有測出)：HWDPFSLSAYFP、WTPVRTNPFLLH、NGHLFSLSAYFP、RTQRNSPFFLCP、SPAFHPEHMGRG、SRAFHPFYRGRA、WYEGPFTLQTWP、LTQHNSPFFLLP和TSNPFFLWYPQP。 二、合成肽及其BSA偶聯(lián)物的活性研究 從上述9個序列中挑選抑制活性較高的5個序列指導人工合成短肽，一部分合成肽與BSA偶聯(lián)，，分別采用U937細胞配體結(jié)合抑制試驗、AIgG競爭抑制試驗、CH50抑制試驗測試其生物學活性。結(jié)果顯示，游離的合成肽對C1q的結(jié)合活性和溶血活性幾無影響，而偶聯(lián)肽對C1q與U937細胞表面受體、AIgG的結(jié)合以及C1q介導的溶血均有抑制作用，表明這5個C1qR模擬肽能抑制C1q與免疫復合物結(jié)合，從而阻斷補體經(jīng)典途徑的激活。 三、合成膚的改建及活性鑒定 根據(jù)前兩部分實驗結(jié)果，我們選擇短膚 短膚a的序列為HWDPFSLSAY下P a加以改建并進一步研究。 設計作如下改建:a1: 。G. GGGHYVDPFSLSAYFPSHS，a2: 以期獲 得結(jié)構(gòu)穩(wěn)定且具補體抑制活性的短膚。人工合成短膚后，鑒定了合成膚 al的活性，結(jié)果顯示al對clq與U937細胞表面受體、AlgG的結(jié)合以 及clq介導的溶血均有一定程度的抑制作用，表明線性膚經(jīng)過再設計， 可能恢復了其在噬菌體顆粒表面的結(jié)構(gòu)，因而重新獲得了Clq抑制活性。 我們篩選、鑒定了一些可抑制補體經(jīng)典途徑激活的ClqR模擬短膚， 它們對于補體異常激活有關疾病的治療具有潛在應用價值，但尚需進一 步深入研究，才可能使之發(fā)展成為有效的小分子補體抑制劑。
【圖文】：

昆蟲、動物、植物天然免疫模式識別的途徑Fig1Pathwaysofilmateirnln切吐tyPattemreeo娜tionininseets，mammalsants
【學位授予單位】：第一軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R392

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本文編號：2622405