發(fā)布時間：2017-03-22 16:14

  本文關(guān)鍵詞：納米抗體用于親和純化傳統(tǒng)抗體的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：高純度的IgG抗體在生物學檢測、臨床診斷和疾病治療上有著廣泛的應(yīng)用,IgG抗體純化的常用方法包括沉淀法和親和層析色譜法。目前,利用ProteinA/G對抗體的Fc片段的特異性結(jié)合,通過親和層析進行抗體純化,是實驗室和工業(yè)上應(yīng)用最廣泛的方法。然而,Protein A/G對抗體結(jié)合的親和力和特異性尚有改善的余地。本研究基于抗原／抗體結(jié)合的高親和力和高特異性,用人源抗體的Fc片段免疫動物,構(gòu)建了駝源重鏈抗體可變區(qū)的噬菌體展示文庫,利用噬菌體展示技術(shù)篩選出了針對人源抗體Fc片段高親和力、高特異性的納米抗體。將篩選出的納米抗體進行大量表達和純化,然后將其交聯(lián)至瓊脂糖基質(zhì)上,用于抗體的親和純化。結(jié)果顯示：與Protein A/G相比,anti-Fc納米抗體具有更高的特異性,能夠獲得純度更高的抗體。此外,本研究所獲得的anti-Fc納米抗體也可用于親和純化偶聯(lián)抗體Fc片段的融合蛋白,這為此類的蛋白表達純化提供了新的途徑。
【關(guān)鍵詞】：納米抗體 抗體文庫 噬菌體展示技術(shù) 親和層析
【學位授予單位】：東南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R392.1
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-11
• 第一章 文獻綜述11-22
• 1.1. 抗體的分離純化11-14
• 1.1.1. 沉淀法11-12
• 1.1.2. 色譜法12-14
• 1.2. 抗體技術(shù)及VHH納米抗體概述14-22
• 1.2.1. 抗體技術(shù)發(fā)展概況14-15
• 1.2.2. 基因工程抗體15-18
• 1.2.3. VHH納米抗體18-22
• 第二章 實驗材料與方法22-42
• 2.1. 實驗試劑和儀器22-26
• 2.1.1. 試劑22-25
• 2.1.2. 儀器25-26
• 2.2. 試驗方法26-42
• 2.2.1. 動物免疫及免疫后血清分析26-27
• 2.2.2. 淋巴細胞的分離和RNA的提取27-28
• 2.2.3. 噬菌體展示納米抗體文庫的構(gòu)建28-33
• 2.2.4. 噬菌體展示納米抗體文庫的篩選33-36
• 2.2.5. 納米抗體的篩選36-38
• 2.2.6. 對獲取抗人源抗體Fc片段納米抗體功能分析38-42
• 第三章 實驗結(jié)果與分析42-51
• 3.1. 免疫后動物血清分析42-43
• 3.2. 噬菌體展示納米抗體文庫的構(gòu)建43-45
• 3.2.1. 從獲取的cDNA中擴增出免疫球蛋白的重鏈可變區(qū)43
• 3.2.2. 噬菌體載體的酶切43-44
• 3.2.3. 噬菌體展示納米抗體文庫有效插入率和多樣性的檢測44-45
• 3.3. 針對人源抗體Fc片段納米抗體的篩選45-51
• 3.3.1. 噬菌體展示納米抗體文庫的篩選45
• 3.3.2. 針對人源抗體Fc片段的特異性陽性克隆的篩選45-47
• 3.3.3. 針對人源抗體Fc片段的納米抗體的誘導(dǎo)表達47
• 3.3.4. 誘導(dǎo)表達后納米抗體的功能檢測47-48
• 3.3.5. 利用人源抗體Fc片段的納米抗體親和層析純化血清中的抗體48-49
• 3.3.6. 偶聯(lián)人源抗體Fc片段的納米抗體親和層析柱回收率的分析49-51
• 結(jié)論51-52
• 討論52-54
• 參考文獻54-58
• 致謝58-59
• 作者簡介59

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本文編號：261863