【摘要】：研究背景與目的:同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是一種含硫氨基酸,體內(nèi)不能合成,只能來源于蛋氨酸的分解代謝,在體內(nèi)主要以蛋白結(jié)合形式存在。其生理作用主要是參與體內(nèi)一碳單位的代謝。目前公認(rèn),體內(nèi)Hcy濃度升高是導(dǎo)致心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。因此,對(duì)同型半胱氨酸在各種心腦血管疾病發(fā)病機(jī)制中所發(fā)揮作用的深入研究具有重要的理論和應(yīng)用價(jià)值。研究表明,Hcy對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用是其致病機(jī)制的始動(dòng)因素。但Hcy內(nèi)皮損傷機(jī)制的研究沒有得出一個(gè)系統(tǒng)的有說服力的結(jié)論。本次研究的主要目的是利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究的理論和技術(shù),對(duì)Hcy作用后的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行觀察和分析,尋找與Hcy作用相關(guān)的蛋白質(zhì)改變,更全面的了解Hcy所引起的細(xì)胞內(nèi)功能蛋白的變化,為Hcy致血管內(nèi)皮損傷機(jī)制的研究提供新的數(shù)據(jù)。 材料與方法:運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)Hcy作用后的HUVEC進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè);用凋亡相關(guān)基因芯片技術(shù)獲得Hcy作用后的HUVEC凋亡相關(guān)基因表達(dá)譜,利用RT-PCR、Western Blot對(duì)其結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,全面分析Hcy誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路;采用2DE-MS技術(shù)路線對(duì)Hcy作用下的HUVEC蛋白質(zhì)表達(dá)譜進(jìn)行研究,并運(yùn)用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫對(duì)Hcy作用后發(fā)生改變的蛋白質(zhì)進(jìn)行功能分析和相互作用分析。
【圖文】：

理后提取細(xì)胞總RNA，并進(jìn)行凋亡相關(guān)基因芯片檢測(cè)。芯片實(shí)驗(yàn)分兩組，對(duì)照組(不加Hey)和實(shí)驗(yàn)組(4ommol/LHey)。運(yùn)用Superarray的芯片檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，并用透射式圖象掃描儀采集原始圖像(如圖1一2所示)。然后用GEarryanaalyzer芯片分析軟件進(jìn)行結(jié)果分析。以管家基因灰度值為標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行所有各點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化，獲得各點(diǎn)灰度值，結(jié)果如圖1一3所示。Hyc作用后各凋亡相關(guān)基因表達(dá)水平改變?nèi)鐖D1一4所示。經(jīng)軟件分析后，最終獲得表達(dá)下調(diào)基因12個(gè)(詳見表1一1)，，表達(dá)上調(diào)基因16個(gè)(詳見表l一2)圖l一2cDNA雜交后基因芯片掃描圖a.對(duì)照組，b.實(shí)驗(yàn)組。由圖可見，兩張芯片上部分點(diǎn)的信號(hào)強(qiáng)度存在顯著差異。第16頁共148頁

四川大學(xué)博十研究生學(xué)位論文b圖1一3基因芯片灰度分析結(jié)果示意圖a.對(duì)照組(omnjol/LHey)，b.實(shí)驗(yàn)組(40nunol/LHey)。圖中所示為經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化后的灰度值。第17頁共148頁
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R543

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張春玲;賈晶;喬春霞;裴晶晶;謝克勤;趙秀蘭;;茶多酚對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子表達(dá)影響[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2008年05期

2 鐘華;胡清華;張會(huì)敏;趙丹;孫志萍;李增春;何芳;;同型半胱氨酸抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2011年08期

3 張玉媛;莊穎;李文學(xué);;金雀異黃酮對(duì)同型半胱氨酸誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用[J];癌變.畸變.突變;2009年05期

4 賀國(guó)洋;李新強(qiáng);李永真;朱慧芳;韓芳毅;;人參皂甙Rg1對(duì)同型半胱氨酸誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的逆轉(zhuǎn)作用[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年05期

5 張輝,黨瑜華,張菲斐;金屬硫蛋白和同型半胱氨酸對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞PAI-1活性及mRNA表達(dá)的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年03期

6 裴晶晶;郭帥;張春玲;謝克勤;張翠麗;趙秀蘭;;茶多酚對(duì)同型半胱氨酸誘導(dǎo)損傷的人血管內(nèi)皮細(xì)胞纖溶功能的影響[J];衛(wèi)生研究;2009年01期

7 裴晶晶;謝克勤;張翠麗;辛星;于麗華;趙秀蘭;;茶多酚體外對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞纖溶功能的保護(hù)[J];營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào);2009年02期

8 張會(huì)敏;張海洋;鄧峰美;徐芬;鐘華;何芳;;同型半胱氨酸對(duì)鈣離子激活狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性及NO含量的影響[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年02期

9 張敬各;張瑞明;李著華;;同型半胱氨酸對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶基因表達(dá)的影響[J];四川生理科學(xué)雜志;2006年04期

10 劉軍須;張敬各;王樹人;;同型半胱氨酸對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶活力及基因表達(dá)的影響[J];華西藥學(xué)雜志;2007年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陸菊明;谷偉軍;楊國(guó)慶;郭清華;潘長(zhǎng)玉;;同型半胱氨酸硫內(nèi)酯誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及機(jī)制的研究[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病分會(huì)第十次全國(guó)糖尿病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

2 劉學(xué)文;叢祥鳳;;同型半胱氨酸對(duì)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖及凋亡的影響[A];2004全國(guó)血脂分析及其臨床應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)、第七屆全國(guó)脂蛋白學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

3 王曼玲;徐建民;;海參糖胺聚糖對(duì)活化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞vWF和PAI-1表達(dá)的影響[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

4 彭惠;洪蘇玲;李平華;李靜;周希;張黎;;高糖促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞p38MAPK和TGFβ2的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

5 斯曉燕;趙永強(qiáng);;低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凝血酶調(diào)節(jié)蛋白、內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體表達(dá)的影響[A];第十一屆全國(guó)血栓與止血學(xué)術(shù)會(huì)議暨血栓栓塞性疾病（血栓與止血）基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文摘要匯編及學(xué)習(xí)班講義[C];2007年

6 吳海星;張學(xué)東;;利魯唑抑制視網(wǎng)膜新生血管形成的實(shí)驗(yàn)研究[A];中國(guó)眼底病論壇·全國(guó)眼底病專題學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2008年

7 劉曉華;張信強(qiáng);柯瑤;王艷艷;王嬙;談文鋒;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子異常表達(dá)的研究[A];第十屆全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

8 劉琦;趙明祥;王志華;吳珊;;組織因子(TF)刺激體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)表達(dá)TNF-α、IL-1研究[A];2006年貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

9 武鴻莉;李字華;林燕華;王瑞;李學(xué)軍;;丹參縮酚酸B誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的GRP78表達(dá)：另一種對(duì)抗氧化應(yīng)激導(dǎo)致細(xì)胞損傷的保護(hù)性機(jī)制[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)微循環(huán)專業(yè)委員會(huì)第十二屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議指南及論文摘要集[C];2007年

10 閔心平;胡志偉;張凱倫;孫宗全;;抑肽酶抑制凝血酶誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞IL-8表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)胸心血管外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2007中華醫(yī)學(xué)會(huì)胸心血管外科青年醫(yī)師論壇論文集心血管外科分冊(cè)[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 柳明;同型半胱氨酸含量高易致骨折[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

2 記者姚春雨通訊員錢勇;人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞重建成功[N];健康報(bào);2003年

3 關(guān)瑜 王擁軍;誰在破壞8歲孩子的動(dòng)脈[N];健康報(bào);2001年

4 程遠(yuǎn)植;一個(gè)人們不熟悉的冠心病危險(xiǎn)因子——同型半胱氨酸[N];健康報(bào);2004年

5 鄭濱;多吃涼拌菜 減慢血管老化速度[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2007年

6 李曉;同型半胱氨酸血癥與中風(fēng)[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

7 記者 方彤;控制同型半胱氨酸升高可有效減少腦卒中發(fā)病[N];健康報(bào);2008年

8 通訊員 錢勇 記者 范又;我國(guó)成功重建永生化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞[N];光明日?qǐng)?bào);2003年

9 錢勇;永生化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞重建成功[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

10 記者唐先武 特約記者錢勇;永生化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞重建成功[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張霽;同型半胱氨酸致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷機(jī)制的研究[D];四川大學(xué);2005年

2 秦獻(xiàn)輝;降低同型半胱氨酸與心腦血管疾病預(yù)防的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

3 孟文芳;1.同型半胱氨酸與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系及其致病機(jī)制研究； 2.人工修飾豬血紅蛋白在失血性休克和抗心肌缺血模型及器官保存中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2002年

4 楊國(guó)慶;2型糖尿病中影響血漿同型半胱氨酸水平的因素及其與血管并發(fā)癥的關(guān)系[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

5 郭清華;同型半胱氨酸對(duì)2型糖尿病微血管病變的影響及其機(jī)制的探討[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2002年

6 孟繁u&;開心膠囊抗內(nèi)皮損傷的作用機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

7 楊家驥;人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)建血管化組織工程真皮的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

8 楊艷娟;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在低氧性肺動(dòng)脈高壓中的作用[D];四川大學(xué);2007年

9 阮驪韜;同型半胱氨酸導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能損傷機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

10 李慧忠;同型半胱氨酸對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)、對(duì)TAFI和TFPI基因表達(dá)的影響及其影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 鄭世雯;不同濃度HCY對(duì)培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS及ET-1轉(zhuǎn)錄水平的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2005年

2 張會(huì)敏;HSP90和小凹蛋白在同型半胱氨酸致血管內(nèi)皮功能障礙中的作用[D];石河子大學(xué);2007年

3 楊學(xué)青;降壓脈凈沖劑治療高血壓的臨床研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2003年

4 張日佳;同型半胱氨酸與糖尿病眼表疾病及視網(wǎng)膜病變關(guān)系的初步研究[D];暨南大學(xué);2004年

5 宋繼東;同型半胱氨酸與腦卒中的關(guān)系及酶聯(lián)免疫（STE）法檢測(cè)血漿Hcy的應(yīng)用研究[D];吉林大學(xué);2005年

6 李云龍;葛根飲-2對(duì)糖尿病性心臟病同型半胱氨酸影響的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2006年

7 王亞軍;血漿同型半胱氨酸水平與2型糖尿病胃腸神經(jīng)病變的關(guān)系[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

8 張曉燕;同型半胱氨酸代謝異常與妊娠高血壓綜合征發(fā)病機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

9 洪侃;血清同型半胱氨酸與2型糖尿病患者慢性并發(fā)癥的相關(guān)性[D];蘇州大學(xué);2004年

10 王占芬;血清同型半胱氨酸水平與腦梗死關(guān)系的臨床研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2615215