【摘要】： ①目的：通過定點誘變的方法，構(gòu)建基因變構(gòu)IL-2(~(88)N→R)的重組克隆，并將其在原核系統(tǒng)中進行高效表達，為研究基因變構(gòu)IL-2(~(88)N→R)的生物學(xué)活性奠定基礎(chǔ)。②方法：從一名健康男子的扁桃體細胞中分離T細胞經(jīng)PHA刺激活化后，提取細胞的RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄構(gòu)建cDNA文庫，經(jīng)套式PCR擴增出編碼IL-2的基因，插入T-A載體后獲得編碼天然IL-2的克隆，，核苷酸測序證實成功后，自行設(shè)計含有突變位點的引物，利用重組PCR技術(shù)，進行定點誘變構(gòu)建基因變構(gòu)IL-2(~(88)N→R)的重組克隆，DNA測序確認變構(gòu)成功。將改構(gòu)后的IL-2基因重組于原核pGEX-4T-2質(zhì)粒上，轉(zhuǎn)化宿主菌E．coli．DH5α中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達IL-2變構(gòu)體，表達產(chǎn)物經(jīng)SDS—PAGE電泳分析。③結(jié)果：獲得了人類天然IL-2的編碼基因克隆和基因變構(gòu)IL-2的編碼基因克隆，并將變構(gòu)IL-2(~(88)N→R)在大腸桿菌中獲得了高效表達。④結(jié)論：IL-2基因的成功定點變構(gòu)及其在原核生物中獲得穩(wěn)定高效的表達，為進一步在真核細胞中表達以及研究制備低毒、高效的新型基因變構(gòu)IL-2藥物奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R392

【參考文獻】

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1 劉新垣;白細胞介素-2研究:從基礎(chǔ)到臨床[J];中國腫瘤生物治療雜志;1995年03期

本文編號：2612462