【摘要】：臨床上導(dǎo)致周圍神經(jīng)缺損的原因很多，如腫瘤切除、創(chuàng)傷等均可造成神經(jīng)缺損。臨床上治療周圍神經(jīng)離斷除及時的神經(jīng)對位縫合外，一般常用自體神經(jīng)移植來治療，但是存在造成供區(qū)神經(jīng)功能喪失、遺留手術(shù)疤痕及供體有限、供區(qū)的附加切口、移植神經(jīng)支配區(qū)的功能障礙等問題，且并不能保證達(dá)到確實的修復(fù)效果。近年來，周圍神經(jīng)組織工程技術(shù)的興起，為神經(jīng)缺損的修復(fù)提供了新的方法和手段。 雪旺細(xì)胞(Schwann cell，SC)是周圍神經(jīng)系統(tǒng)的膠質(zhì)細(xì)胞，在周圍神經(jīng)組織工程修復(fù)中充當(dāng)種子細(xì)胞，但臨床應(yīng)用中來源有限，細(xì)胞增殖時間較長，限制了它的應(yīng)用，因此快速獲得組織工程化人工神經(jīng)所需要的SC非常重要。目前國內(nèi)外在此方面有較多的研究，但普遍存在著技術(shù)復(fù)雜、所需試劑昂貴、SC純度不高等不足。為此，本試驗采用分步法分離、培養(yǎng)雪旺細(xì)胞，Ara-C抑制成纖維細(xì)胞生長，并應(yīng)用b-FGF刺激雪旺細(xì)胞的增殖，，對其生物特性進(jìn)行研究，為其臨床運用打下基礎(chǔ)。 目的：本實驗采取SD乳鼠雪旺細(xì)胞(SC)作為周圍神經(jīng)組織工程的種子細(xì)胞，在體外分離培養(yǎng)，觀察雪旺細(xì)胞在體外存活、生長情況，目的在于改進(jìn)雪旺細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件，尋找一種較好的獲取雪旺細(xì)胞的方法，以獲得足夠數(shù)量的較純凈的雪旺細(xì)胞，為組織工程化的人工神經(jīng)在臨床的應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 方法：取SD乳鼠坐骨神經(jīng)及臂叢神經(jīng)，剪碎至1mm的植塊，復(fù)合酶消化后進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，Ara-C抑制成纖維細(xì)胞生長，b-FGF刺激SC增殖，低濃度胰酶快速消化傳代進(jìn)一步純化雪旺細(xì)胞，采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、生長曲線測定、S-100蛋白鑒定。 培養(yǎng)1、3、5、7天后，相差顯微鏡下觀察SC的生長情況及其形態(tài)。 結(jié)果：1、經(jīng)上述方法分離獲取了較高純度的SC，保持了細(xì)胞的活性；2、Ara-C對成纖維細(xì)胞的生長有抑制作用，但對雪旺細(xì)胞的生長影響較小；3、 一定濃度的b一FGF，可促進(jìn)SC的增殖。 結(jié)論:1、SD乳鼠坐骨神經(jīng)和臂叢神經(jīng)中分離培養(yǎng)SC來源確實、取材方 便，可作為周圍神經(jīng)組織工程實驗研究的細(xì)胞來源。2、聯(lián)合采用復(fù)合酶消化、 組織塊培養(yǎng)、Ara一C抑制成纖維細(xì)胞生長、b一FGF促進(jìn)雪旺細(xì)胞增殖是一種較 經(jīng)濟(jì)、簡便、實用的方法，可獲得較高純度的雪旺細(xì)胞。3、雪旺細(xì)胞體外培 養(yǎng)過程中，Ara一C能較有效地抑制成纖維細(xì)胞的生長，b一FGF對SC有一定的 增殖作用，能促進(jìn)SC細(xì)胞在體外條件下增殖，有可能滿足SC作為種子細(xì)胞 在PN組織工程中應(yīng)寫的需求。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2597929