【摘要】： 目的:建立實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎(Experimental allergic encephalomyelitis, EAE)小鼠模型,流式細(xì)胞儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組小鼠脾臟CD4+ T和CD4+CD25+ T細(xì)胞數(shù)量的變化,來(lái)研究CD4+ T細(xì)胞和CD4+CD25+ Treg細(xì)胞在EAE發(fā)病機(jī)制中的作用,為進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)制及治療方法提供依據(jù)。 方法:用髓鞘堿性蛋白(Myelin basic protein, MBP)加福氏完全佐劑制備抗原佐劑乳化物,分別于0d、7d免疫誘導(dǎo)BALB/c小鼠。模型組分高劑量組與低劑量組。高劑量組每只0.2ml抗原佐劑乳化物,含400μg MBP、百日咳疫苗(Bacilus pertusis vaccine,BPV)0.1ml;低劑量組每只0.2ml抗原佐劑乳化物,含200μg MBP、BPV 0.1ml;對(duì)照組PBS +CFA+BPV抗原佐劑乳化物0.3ml,正常組不作任何處理。觀察和比較各免疫組小鼠的體重變化、發(fā)病臨床表現(xiàn)并進(jìn)行癥狀分級(jí)評(píng)分。在二次免疫后取癥狀明顯的模型組、對(duì)照組及正常組小鼠的腦組織進(jìn)行切片和HE染色。觀察比較各免疫組小鼠的組織病理變化,分析不同劑量抗原誘導(dǎo)小鼠發(fā)病情況。無(wú)菌分離小鼠脾淋巴細(xì)胞,經(jīng)非特異性抗原植物血凝素(PHA)刺激后,ELISA方法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中干擾素-γ(IFN-γ)的水平。ELISA方法檢測(cè)自身抗體水平。取小鼠脾臟制備單個(gè)脾細(xì)胞懸液,分別加入10μl單克隆抗體,孵育后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)模型動(dòng)物脾細(xì)胞中CD4+ T細(xì)胞和CD4+CD25+ T細(xì)胞數(shù)目。無(wú)菌取小鼠尾部血清,檢測(cè)特異性自身抗體水平。 結(jié)果:多數(shù)實(shí)驗(yàn)組小鼠出現(xiàn)EAE的臨床癥狀。實(shí)驗(yàn)組小鼠最早于抗原誘導(dǎo)后第三天開(kāi)始出現(xiàn)動(dòng)作遲緩,尾部無(wú)力等癥狀。第二次免疫后逐漸出現(xiàn)進(jìn)食減少,行動(dòng)緩慢,弓背,后肢或前肢中度無(wú)力,跛行甚至后肢完全癱瘓等癥狀,發(fā)病嚴(yán)重者死亡。其中高劑量組小鼠有9只出現(xiàn)尾部無(wú)力(1級(jí)),3只出現(xiàn)后肢或前肢中度無(wú)力(2級(jí)),1只后肢嚴(yán)重?zé)o力,跛行(3級(jí)),3只死亡(5級(jí)),發(fā)病率為89%。低劑量組小鼠8只出現(xiàn)尾部無(wú)力(1級(jí)),2只出現(xiàn)后肢或前肢中度無(wú)力(2級(jí)),1只死亡(5級(jí)),發(fā)病率為61%。對(duì)照組小鼠沒(méi)有發(fā)病。光鏡下見(jiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠腦組織血管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn),呈“袖套”樣改變,腦組織疏松化,對(duì)照組小鼠腦組織未見(jiàn)明顯病理改變。EAE組的IFN-γ的水平明顯高于對(duì)照組(P0.05)。CD4+ T細(xì)胞數(shù)目明顯上升,CD4+CD25+ T細(xì)胞數(shù)目變化不明顯。模型組抗體水平明顯高于對(duì)照組(P0.01)。 結(jié)論: (1)本研究采用免疫誘導(dǎo)法所建立的BALB/c小鼠EAE動(dòng)物模型在臨床表現(xiàn)、病理變化等方面均符合EAE改變,模型穩(wěn)定、可靠。(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物IFN-γ水平增高,可能是導(dǎo)致自身反應(yīng)性Th1細(xì)胞升高的原因之一。CD4+ T細(xì)胞增殖,CD4+CD25+ Treg與CD4+ T細(xì)胞比值改變和CD4+CD25+ Treg細(xì)胞相對(duì)下降可能是EAE的致病機(jī)制之一。
【圖文】：

20圖 2 正常組、對(duì)照組、模型組小鼠腦組織病理變化（HE×40）A：正常小鼠腦組織；B：對(duì)照組小鼠腦組織；C, D, E：模型組小鼠腦組織Fig. 2 The morphological changes of brain tissue in the normal, the control and model.A: the brain tissue of the normal mice; B: the brain tissue of the control mice;C, D, E: the brain tissue of the model mice．

25圖 5 流式分析 CD4+T 細(xì)胞和 CD4+CD25+T 細(xì)胞數(shù)水平A，B：陰性對(duì)照；C：正常組；D：對(duì)照組；E：模型組。Fig. 5 FACS analysis of the numbers of CD4+T cell and CD4+CD25+T cell.A, B: negative; C: normal; D: control; E model.
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2574131