【摘要】：【目的】 本實驗通過綜合運用體外細胞培養(yǎng)技術、細胞免疫組化技術、流氏細胞儀技術及相關生化指標檢測等多種方法初次研究碘濃度高低對體外培養(yǎng)的血管內皮細胞生長與功能的影響；觀察不同碘濃度在相同時間段對血管內皮細胞的影響，為探討微量元素碘對人體的影響與作用提供有效的實驗支持，豐富對碘的實驗研究。 【材料與方法】 1、細胞培養(yǎng)：以含有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)ECV304內皮細胞株，傳代待細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定后進行各項實驗。 2、制備單細胞懸液密度為0.8～1.0×10~5／ml，種24孔板，待細胞貼壁后加入不同濃度的碘化鉀，每板均設對照組，于4、8、12、24、48小時時觀察細胞生長狀況。 3、MTT實驗，檢測細胞增殖情況。在碘處理后的96孔細胞培養(yǎng)板中每孔添加MTT試劑20μl(5mg／ml)，37℃孵育4h、8h、12h、24h及48h后終止培養(yǎng)，，小心棄去培養(yǎng)液，用胰酶消化細胞，每孔加入150μl二甲基亞砜(DMSO)溶解，振蕩10min。用酶標分析儀在490nm波長下測其光吸收值(OD)，可間接反映細胞數量。 4、細胞免疫組化：將消毒好的蓋玻片放入24孔培養(yǎng)板，種細胞，貼壁后加入實驗因素，培養(yǎng)12h及24h后終止。除去培養(yǎng)基，PBS沖洗，滴加一抗二抗，顯色前用鑷子小心將蓋片取出進行DAB顯色，觀察PCNA的表達。 5、流式細胞儀技術：待測細胞經離心—PBS沖洗—吹勻—固定—再離心—沖洗—吹打—染色(4℃，20-30分鐘)后，400目尼龍網過濾后上機檢測。Cell quest分析軟件分析，用細胞分裂增殖指數(PI)表示相對增殖力。PI=(S+G_2／M)／(G_0／G_1+S+G_2／M)。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R363.1

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本文編號：2568919