【摘要】： 目的:1.研究結(jié)核分枝桿菌H37Ra免疫小鼠后產(chǎn)生的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。2.評價結(jié)核分枝桿菌H37Ra免疫小鼠對結(jié)核分枝桿菌毒株攻擊的免疫保護(hù)性。 方法:1. BALB/c小鼠隨機分為3組:H37Ra組、BCG組和NS組,分別用H37Ra、BCG和NS皮內(nèi)注射,免疫后第6w,做小鼠PPD遲發(fā)型超敏反應(yīng)實驗。2.第8w處死部分小鼠,測定小鼠臟器重量指數(shù);肺組織病理學(xué)檢測。3.分離小鼠外周血血清,ELISA法測定血清特異性IgG抗體的水平。4.流式細(xì)胞分析儀檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞亞群的變化。5.取小鼠脾淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)并用PPD刺激,ELISA法檢測培養(yǎng)上清液中IFN-γ和IL-4的產(chǎn)生水平;MTT法檢測脾淋巴細(xì)胞的刺激指數(shù)(SI)。6.免疫后第8w,用5×106CFU MTB毒株H37Rv經(jīng)小鼠腹腔注射,4w后處死小鼠,測定小鼠臟器重量指數(shù)。7.取稀釋小鼠脾臟、肝臟和肺臟勻漿接種于改良羅氏培養(yǎng)基,培養(yǎng)21d后計數(shù)CFU。8.同時取肺組織做病理學(xué)檢查。 結(jié)果:1.H37Ra免疫小鼠后能誘導(dǎo)顯著的遲發(fā)型超敏反應(yīng),以24h為最佳觀測時間。2.免疫小鼠8w后,肝、肺、脾、腎臟器重量指數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義;病理學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)H37Ra免疫小鼠后肺組織無明顯改變。3.H37Ra免疫小鼠血清中抗PPD IgG抗體的水平顯著升高。4.H37Ra免疫小鼠脾臟CD3+T細(xì)胞的百分率為(41.63±1.68)%,顯著高于NS對照組(38.44±1.87)%(P0.05);H37Ra免疫小鼠脾臟CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫小鼠,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各組間脾臟CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+T/CD8+T比值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.脾淋巴細(xì)胞SI、IFN-γ和IL-4水平檢測發(fā)現(xiàn)H37Ra免疫組顯著高于NS對照組(P0.05);H37Ra免疫組略高于BCG免疫組。6.感染4w后H37Ra和BCG組小鼠肝、肺、脾、腎臟器重量指數(shù)較NS對照組均顯著降低(P0.05),但H37Ra和BCG組間小鼠各臟器重量指數(shù)均無顯著性差異(P0.05)。7.H37Ra組小鼠肺、脾、肝組織荷菌量與NS對照組比較分別下降0.954、1.228和0.883log10CFU,差異有顯著性(P0.05)。H37Ra組各臟器組織荷菌量與BCG組之間差異均無顯著性(P0.05)。8.組織病理分析發(fā)現(xiàn):H37Ra組小鼠肺泡腔有漿液性滲出,肺泡間隔增厚,局部有巨噬細(xì)胞浸潤和肉芽腫形成。BCG組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)完整,巨噬細(xì)胞的浸潤略增加,肺泡壁略增厚。而NS對照組病變嚴(yán)重而廣泛,肺泡腔內(nèi)有明顯的出血性滲出液,大部分肺泡壁腫脹、增厚,肺泡結(jié)構(gòu)被破壞。 結(jié)論:1.H37Ra免疫小鼠后可以誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗結(jié)核的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。2.H37Ra免疫小鼠后能夠抵抗毒株H37Rv的攻擊,但效果不及BCG。
【圖文】：

273 4圖 1-6. 免疫小鼠肺組織病理表現(xiàn)（HE 染色，，×100）Fig.1-6. Micrographs of the lung tissue in the vaccination group mice.（HE staining, ×100）1-2 H37Ra immunized group; 3 BCG immunized group; 4 NS control group

圖 2-1. 恢復(fù)毒力 H37RV培養(yǎng) 8w 后的菌落-1. The MTB H37RVpassed through mice was growing in the cultur
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳雪瓊;鄭越;徐燕杰;張俊仙;陸陽;張靈霞;史迎昌;李洪敏;韓永;曹立雪;李忠明;;不同劑量結(jié)核病DNA疫苗及細(xì)胞因子聯(lián)合免疫的研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2006年10期

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本文編號：2553366