發(fā)布時(shí)間：2019-09-20 07:39

【摘要】： 紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)是毛癬菌屬中最常見(jiàn)的親人性皮膚癬菌,臨床上約80%體股癬和72%手足癬及甲癬皆是由紅色毛癬菌引起。傳代易使表型變異等弊端給菌種鑒定帶來(lái)極大困難。因此,從基因水平鑒定菌種尤為重要。目前對(duì)核糖體DNA非轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(NTS)的研究已成研究熱點(diǎn)。本研究將6株不同表型的紅色毛癬菌傳至20代,比較傳代前后表型的變化;并且用PCR法對(duì)6株紅色毛癬菌原代及第20代的核糖體保守區(qū)(5.8S和ITS2)和非轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(NTS)內(nèi)的兩個(gè)重復(fù)亞單位(TRS1,TRS2)擴(kuò)增,序列測(cè)定,比較原代與第20代基因型及序列有無(wú)變化,從而探討傳代對(duì)紅色毛癬菌表型和基因型穩(wěn)定性的影響。 材料和方法:標(biāo)準(zhǔn)株為美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)標(biāo)本ATCC294(American type cult -ure collection)保存菌株,紅色毛癬菌臨床分離株5株。根據(jù)菌株的形態(tài),生理生化學(xué)鑒定為紅色毛癬菌。所有菌株采用沙氏瓊脂試管培養(yǎng)基培養(yǎng),間隔14天傳代1次,均傳至20代。表型的變異依據(jù)菌落的形態(tài)及色素。分別對(duì)6株原代及第20代的菌株,以真菌保守區(qū)核糖體基因和ITS2基因區(qū)內(nèi)引物(引物1序列為5’-GCATCGATGAAGAACGCAGC -3’,引物2序列為5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’),用PCR法擴(kuò)增,基因序列測(cè)定,核苷酸同源性檢索用BLAST軟件進(jìn)行分析。再以TrNTSF-2(5’-ACCGTATTAAGCTAGCGCTGC-3’), TrNTSR-4 (5’-TGCCACTTCGATTAG GAGGC-3’)和TrNTSR-1(5’-CTCAGTCGAACCGTGAGGC-3’), TrNTSC-1 (5’- CGAGACCACGTGATACATGCG-3’)兩對(duì)引物分別擴(kuò)增6株原代及相應(yīng)的第20代紅色毛癬菌的TRS1區(qū)和TRS2區(qū),基因序列測(cè)定,結(jié)果用clustalx軟件進(jìn)行比較分析。 結(jié)果:(1)6株紅色毛癬菌經(jīng)傳至20代,菌落形態(tài)、質(zhì)地及色素隨之變異,第一次傳代至第20代變異率由33.3%增至100.0%。形態(tài)逆轉(zhuǎn)率100.0%,色素逆轉(zhuǎn)率50.0%。(2)核糖體保守區(qū)(部分5.8s和ITS-2)基因序列測(cè)定,片段大小均約為320bp,與基因庫(kù)紅色毛癬菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC28188基因序列比,其同源性均達(dá)99%,再次證明,經(jīng)傳代后的菌仍為紅色毛癬菌。(3)在部分5.8S和ITS-2區(qū)、TRS-1區(qū)、TRS-2區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,原代及第20代的PCR指紋圖無(wú)差異。(4)對(duì)
【圖文】：

部分菌種表型變化圖（標(biāo)準(zhǔn)株、13、15、18、22號(hào)菌）

－26株紅色毛癬菌從原代傳至20代的菌落形態(tài)變化
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R379

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉光澤,賈彥征,王洪敏,熊一力;乙型肝炎病毒轉(zhuǎn)基因小鼠外源基因的復(fù)制和傳代穩(wěn)定性觀察[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;2001年01期

2 李樹根,林志雄,李力施,羅瓊,陳茹,吳時(shí)清,顏思通,童昆周,畢英佐,薛春宜,何潔;雞馬立克氏�、裥腿醵局甑倪x育[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;1999年02期

3 倪艷秀,何孔旺,何家惠,王繼春,俞正玉,侯繼波,呂立新;豬鏈球菌2型SS_2-1和SS_2-H株的培養(yǎng)穩(wěn)定性檢測(cè)[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2002年04期

4 付喬芳;邱軍強(qiáng);胡鯤;楊先樂(lè);安健;;嗜水氣單胞菌毒力基因在傳代過(guò)程中的穩(wěn)定性研究[J];生物技術(shù)通報(bào);2011年09期

5 劉光澤,熊一力,王洪敏,賈彥征,周軍輝,潘菲,張宜俊;近交系高表達(dá)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的建立及表達(dá)傳代穩(wěn)定性[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2003年06期

6 朱薇玲;克拉維酸產(chǎn)生菌的優(yōu)化培養(yǎng)[J];生物技術(shù);2003年01期

7 王曉容,劉潤(rùn)忠,黃素青,林美,賴仕霞,江國(guó)濤;棉鈴蟲經(jīng)90代飼養(yǎng)的蛹重與生殖能力[J];仲愷農(nóng)業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào);1998年01期

8 賀石漢,李寶宗,郜金榮,葉林柏,鄭永勛,佘應(yīng)龍,吳正輝;重組pQE30 tPAr質(zhì)粒在JM109菌株中的穩(wěn)定性研究[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版);2003年04期

9 張光明;張永欣;劉馨;孫茂盛;;輪狀病毒P[2]G3株在Vero細(xì)胞上的傳代適應(yīng)性[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2008年12期

10 常萬(wàn)存,竇忠英,馬鴻飛,楊春榮,高志敏,雷安民,樊敬莊;原始生殖細(xì)胞的人類胚胎干細(xì)胞克隆[J];西北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1998年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 夏修蛟;沈宏;朱惠軍;劉澤虎;桑波;鐘燕;許愛(ài)娥;;紅色毛癬菌在7種培養(yǎng)基上的生物學(xué)特性[A];2011全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 胡小平;陳偉;尤立平;萬(wàn)U，

本文編號(hào)：2538664