發(fā)布時(shí)間：2019-09-04 10:12

【摘要】：目的 以經(jīng)誘導(dǎo)具有成骨細(xì)胞活性的骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)為種子細(xì)胞，同種異體生物衍生骨為載體，觀察細(xì)胞的體外培養(yǎng)特性和在生物衍生骨上的復(fù)合生長(zhǎng)情況，為進(jìn)一步研究此復(fù)合材料修復(fù)骨缺損提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 運(yùn)用密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法，分離純化兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞，并進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增；應(yīng)用成骨添加劑(地塞米松10~(-8)mol／L、β-甘油磷酸鈉10mmol／L、L-抗壞血酸為50μg／ml)定向誘導(dǎo)傳代骨髓基質(zhì)細(xì)胞為成骨細(xì)胞；制作同種異體生物衍生骨，，與誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞進(jìn)行體外復(fù)合培養(yǎng)，并在相差顯微鏡和掃描電鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。 結(jié)果 密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離純化的兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞在體外生長(zhǎng)良好，能連續(xù)傳代；傳代細(xì)胞經(jīng)成骨添加劑誘導(dǎo)后，具有較強(qiáng)的堿性磷酸酶活性，并能表達(dá)Ⅰ型膠原蛋白，呈現(xiàn)成骨細(xì)胞活性；骨髓基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞能在同種異體生物衍生骨上貼附生長(zhǎng)、增殖。 結(jié)論 骨髓基質(zhì)細(xì)胞可有效分離、純化，體外培養(yǎng)、擴(kuò)增效果好，易向成骨方向誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化，可作為骨組織工程的理想種子細(xì)胞；同種異體生物衍生骨對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞有良好的細(xì)胞粘附性和組織相容性，細(xì)胞能在其上保持成骨細(xì)胞活性，有望成為種子細(xì)胞的支架材料運(yùn)用于骨組織工程研究。
【圖文】：

殖速度明顯加快，前三代傳代細(xì)胞均于72小時(shí)后貼滿瓶底(圖l一3)。MSCs經(jīng)多次傳代后其分布更均勻有序，形態(tài)趨向單一，多為梭形細(xì)胞(圖1一4、5)。連續(xù)傳5代，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化。換含有成骨誘導(dǎo)劑的條件培養(yǎng)液培養(yǎng)后，于倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)相對(duì)緩慢，約4一5天長(zhǎng)滿單層。細(xì)胞形態(tài)也逐漸改變，由原先比較均勻一致的成纖維細(xì)胞樣變?yōu)椴灰?guī)則形，伸出多個(gè)突起并逐漸相互連接。細(xì)胞間沒(méi)有接觸抑制，呈復(fù)層生長(zhǎng)，逐漸堆積。圖1一3第二代細(xì)胞，/20。圖1一4傳代細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣

四川大學(xué)碩十學(xué)位論文出較強(qiáng)的陽(yáng)性反應(yīng)，可見(jiàn)絕大部分細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黑色或灰黑色硫化鉆顆粒，(圖1一6)。提示誘導(dǎo)培養(yǎng)的細(xì)胞具有較強(qiáng)的堿性磷酸酶活性。I型膠原蛋白免疫熒光染色后，在熒光顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)紅色熒光，呈陽(yáng)性反應(yīng)，各個(gè)細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度強(qiáng)弱不一致(圖l一7)。提示誘導(dǎo)培養(yǎng)的細(xì)胞可以表達(dá)I型膠原蛋白，且主要集中在胞核附近。圖l一6鈣鉆法染色示胞漿中棕黑色硫化鉆顆粒，x40。圖1一7免疫熒光法檢測(cè)I型膠原蛋白，x40。3.討論3.1骨組織工程種子細(xì)胞的來(lái)源問(wèn)題利用組織工程的方法修復(fù)骨缺損成為創(chuàng)傷修復(fù)研究的熱點(diǎn)，而理想的種子細(xì)胞和支架材料是骨組織工程的兩大關(guān)鍵因素。理想的骨組織工程種子細(xì)胞應(yīng)具有以下特點(diǎn):①取材容易安全;②體外培養(yǎng)增殖能力強(qiáng);③易于向成骨方向分化;④植入體內(nèi)能保持成骨活性。骨髓來(lái)源豐富，取材方便安全。骨髓基質(zhì)細(xì)胞是骨髓基質(zhì)系統(tǒng)的非造血性干細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2531672