【摘要】：腎綜合征出血熱(HFRS)是一種由漢坦病毒引起的危害極大的急性病毒性傳染病,臨床上以發(fā)熱、出血和急性腎功能損害為主要特征。該病在我國(guó)危害尤為嚴(yán)重,目前年發(fā)病人數(shù)為5～10萬(wàn)人,病死率較高。目前尚無(wú)特異有效的治療方法。 鼠源性單克隆抗體(mAb)在病毒性疾病的治療上已有應(yīng)用,但由于存在人抗鼠抗體(HAMA)應(yīng)答,不僅可能會(huì)影響其治療效果,甚至?xí)饑?yán)重的變態(tài)反應(yīng)。因此,如何降低鼠源性mAb的免疫原性成為當(dāng)前研究的重要課題。小分子抗體是通過(guò)基因工程技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一種很有應(yīng)用前景的新一代抗體。通過(guò)基因工程技術(shù)改造形成的小分子抗體可以保持親本抗體的免疫學(xué)活性,且具有免疫原性弱,穿透力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。因此,用基因工程方法制備小分子抗體并盡量減少其免疫原性是克服鼠源性mAb缺點(diǎn)的有效方法之一。 本研究用我室制備的具有高中和活性和高保護(hù)性的鼠源性抗?jié)h灘病毒(HTNV)G2糖蛋白mAb 3G1和抗HTNV核蛋白(NP)mAb 1A8的基因構(gòu)建雙特異性抗體表達(dá)載體,分別在大腸桿菌及昆蟲(chóng)細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),并鑒定其免疫學(xué)活性,為開(kāi)發(fā)新一代特異性治療HFRS的藥物奠定
【圖文】：

為IASVH基因，即構(gòu)建成重組質(zhì)粒IASVH一3GIV口pComb3E。用Ncol和助el雙酶切鑒定，，可切出70Obp的片段，Pstl單酶切鑒定，可切出約1.SKb及約300Pb的片段，均與預(yù)期結(jié)果相符(圖9)。將3GI的VH基因克隆入IAS一SeFv一C汀pUC18，即可構(gòu)建3GIVH一IASVL一CK異源抗體ScFv基因，VL基因后連接CK基因用于檢測(cè)表達(dá)抗體的活性。將3GIVH一IA8vL一C‘基因克隆入pLpGEM7后，可加上表達(dá)所需的brs、前導(dǎo)膚基因序列和合適的克隆位點(diǎn)等，再克隆入IASVH一3GIVLP/Comb3E，恢復(fù)了pComb3表達(dá)輕鏈的框架，即構(gòu)建成雙特異性抗體表達(dá)載體scFv一sFcv’P/Comb3。再用PSol和Nhol酶切，除去噬菌體衣殼蛋白基因m

可切出約800多bp的片段;用腸口I單酶切鑒定，可切出800多bp及約300多bp的片段;用EcoR卜幾腸al雙酶切鑒定，可切出約1.IKb的片段，均與預(yù)期結(jié)果相符(圖10)。圖9重組質(zhì)粒IA8vH一3GlvLP/comb3E的限制性?xún)?nèi)切酶酶切分析
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王立良;桿狀病毒載體的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));1998年05期

2 衛(wèi)立辛,汪美先,徐志凱,汪力亞;單克隆抗體對(duì)腎綜合征出血熱病毒感染乳鼠保護(hù)作用的研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1989年02期

本文編號(hào)：2527592