發(fā)布時(shí)間：2019-08-16 12:28

【摘要】：第一部分 近交系大鼠胚胎中腦前體細(xì)胞體外培養(yǎng)研究 目的：體外培養(yǎng)近交系大鼠胚胎腹側(cè)中腦前體細(xì)胞(ventral mesencephalic precursor，VMP)并誘導(dǎo)分化為多巴胺能神經(jīng)元(dopaminergic neuron，DN)，為進(jìn)一步研究DN定向分化的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法：取材胎齡11天(E11)的近交系大鼠胚胎VMP，體外用含堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的無血清培養(yǎng)液擴(kuò)增培養(yǎng)7天，然后換用含L-抗壞血酸-2-磷酸酯倍半鎂鹽(L-Ascorbic acid-2-phosphate sesquimagnesium salt，AA-2P)的特殊培養(yǎng)液誘導(dǎo)分化7天，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并繪制生長曲線。分別以TH(酪氨酸羥化酶)、β-Tubulin(微管蛋白)、Nestin(巢蛋白)、GFAP(神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白)抗體標(biāo)記DN、神經(jīng)元、前體細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞，，鑒定VMP分化情況，流式細(xì)胞儀檢測分化細(xì)胞中的TH陽性細(xì)胞比例。 結(jié)果：近交系大鼠胚胎VMP在體外培養(yǎng)時(shí)能快速擴(kuò)增并分化，培養(yǎng)14天后細(xì)胞總數(shù)擴(kuò)增至培養(yǎng)前49.76±6.34倍，免疫熒光染色顯示β-Tubulin Ⅲ陽性的神經(jīng)元中(71.33±20.42)％為TH陽性的DN，后者占細(xì)胞總數(shù)的(24.85±12.85)％。細(xì)胞體系中還包括一些前體細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞等。流式細(xì)胞儀檢測顯示TH陽性神經(jīng)元數(shù)占神經(jīng)元總數(shù)的75.45％。 結(jié)論：近交系大鼠胚胎VMP在合適的體外培養(yǎng)條件下能夠快速增殖，經(jīng)誘導(dǎo)能定向分化為較高比例的DN，可以作為深入研究DN定向分化分子機(jī)制的細(xì)胞模型。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R329.2

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本文編號：2527436