【摘要】： 目的:肝臟具有很強(qiáng)的再生能力。大鼠肝切除70%后,殘余肝在數(shù)小時(shí)內(nèi)啟動(dòng)再生過(guò)程,并于術(shù)后7天左右的時(shí)間完全修復(fù)缺失肝組織。肝再生是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,目前對(duì)再生機(jī)制的研究仍不十分清楚。解偶聯(lián)蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)是線(xiàn)粒體內(nèi)膜上的質(zhì)子通道,廣泛分布于嚙齒類(lèi)動(dòng)物各組織器官中。UCP2被激活時(shí)能引發(fā)質(zhì)子漏,質(zhì)子經(jīng)UCP2滲漏回基質(zhì),使氧化磷酸化部分解耦聯(lián);適時(shí)降低線(xiàn)粒體膜電位,減少過(guò)量ROS的產(chǎn)生。因此,UCP2對(duì)細(xì)胞能量代謝及ROS產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)作用。已知正常肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)UCP2,但肝部分切除或肝毒劑損傷肝臟后導(dǎo)致肝再生時(shí),再生肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞UCP2表達(dá)卻顯著增加。UCP2在再生肝內(nèi)高表達(dá)有何意義目前還不十分清楚。 本研究通過(guò)制備大鼠肝再生模型,動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)肝再生過(guò)程中UCP2的表達(dá);探討UCP2表達(dá)與肝細(xì)胞增殖、肝細(xì)胞功能的相關(guān)性,能進(jìn)一步認(rèn)識(shí)肝臟生理活動(dòng)的規(guī)律和肝再生的調(diào)控機(jī)制;為臨床肝損傷、部分切除甚至移植等肝損傷與再生的應(yīng)用提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:本研究選用健康雄性Wistar大鼠,體重180±20g,隨機(jī)分為假手術(shù)組(SH)和肝切組(PH),肝切組大鼠根據(jù)術(shù)后的不同時(shí)間點(diǎn)又分為24h,48h,72h,96h四組,每組5只。按Higgins和Anderson方法,將禁食12 h后大鼠行70%肝部分切除術(shù),術(shù)后自由攝食飲水。假手術(shù)組大鼠只行開(kāi)腹手術(shù),不實(shí)行肝切。手術(shù)后在上述不同時(shí)間點(diǎn)稱(chēng)量大鼠體重;斷頭取血,血清標(biāo)本4℃保存?zhèn)溆?稱(chēng)取新鮮肝組織0.5g,用于丙二醛(malondialdehyde,MDA)、轉(zhuǎn)氨酶等生化指標(biāo)檢測(cè);并提取肝線(xiàn)粒體測(cè)定膜電位、UCP2表達(dá)。另取部分肝組織,經(jīng)10%中性福爾馬林固定,用于形態(tài)和免疫組織化學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果: 1.再生肝的重量及組織形態(tài)學(xué)改變 與假手術(shù)組比較,術(shù)后24h肝重與體重比值顯著降低(P 0.05)。48h、72h比值逐漸升高,至96h比值接近假手術(shù)組比值。HE染色顯示,假手術(shù)組肝細(xì)胞核大小正常,罕見(jiàn)核分裂。肝切后24h和48h肝細(xì)胞增殖旺盛,核分裂顯著增加,中央靜脈擴(kuò)張,其周?chē)?xì)胞松散;肝切96h肝細(xì)胞重構(gòu)排列成索狀,偶見(jiàn)核分裂,肝臟處于再生末期。 2.再生肝血清轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白改變 肝切后24h大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶急劇增高,谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)達(dá)到假手術(shù)組的3倍左右(P 0.05),而谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)達(dá)到假手術(shù)組6倍左右(P 0.001),至72h和96h已經(jīng)恢復(fù)到假手術(shù)組水平值。肝切后24h大鼠血清白蛋白含量較假手術(shù)組明顯降低(P 0.05),48h、72h逐漸升高,至96h恢復(fù)到假手術(shù)組水平。 3.再生肝組織內(nèi)MDA含量的改變 肝切后24h時(shí)肝組織的MDA含量升高,是假手術(shù)組7倍左右(P 0.05),48、72h下降,96h時(shí)MDA含量仍略高于假手術(shù)組。 4.再生肝UCP2的表達(dá)變化 假手術(shù)組肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)幾乎不表達(dá)UCP2蛋白。在肝切術(shù)后24h表達(dá)最多,呈強(qiáng)陽(yáng)性,48、72h表達(dá)下降,至肝切術(shù)后96h僅有少量弱表達(dá)。Western blot檢測(cè)與免疫組化結(jié)果一致,肝切術(shù)后24h時(shí)UCP2蛋白水平明顯高于假手術(shù)組(P 0.001)。肝切48小時(shí)比假手術(shù)組高(P 0.05),肝切96小時(shí)UCP2表達(dá)接近假手術(shù)組。 5.再生肝增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)變化 PCNA陽(yáng)性細(xì)胞統(tǒng)計(jì)顯示,肝切術(shù)后24h肝細(xì)胞PCNA強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),為假手術(shù)組13倍(P 0.05)。隨后下降,肝切術(shù)后48h組為假手術(shù)組的8倍(P 0.05),到肝切術(shù)后96h較少表達(dá)。 6.再生肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位和肝組織內(nèi)ATP含量的變化 各時(shí)間點(diǎn)的再生肝線(xiàn)粒體膜電位均高于假手術(shù)組,肝切24h組均值為211.19mv,和其它組比較均有顯著差異(P 0.001);肝切術(shù)后48h膜電位均值為187.1mv,仍高于對(duì)照組(P 0.01)。肝切術(shù)后24h,加入GDP后線(xiàn)粒體膜電位明顯下降,均值從211.19mv降到181.70mv(P 0.01)。肝切術(shù)后24h肝組織內(nèi)ATP含量最低,為假手術(shù)組的25%(P 0.001),48、72h逐漸增高,到肝切96h已高于假手術(shù)組(P 0.001)。 7.再生肝UCP2表達(dá)與肝細(xì)胞增殖、線(xiàn)粒體膜電位相關(guān)性分析 將UCP2表達(dá)與肝細(xì)胞增殖、線(xiàn)粒體膜電位做相關(guān)性分析可知,UCP2表達(dá)和肝細(xì)胞增殖、線(xiàn)粒體膜電位之間存在顯著的正相關(guān)(P 0.001,r=0.946;P 0.001,r=0.813);肝細(xì)胞增殖和線(xiàn)粒體膜電位之間也存在顯著的正相關(guān)(P 0.001,r=0.843)。 結(jié)論: 1.肝部分切除導(dǎo)致肝功能下降,隨肝的再生逐漸恢復(fù)。 2.大鼠肝再生過(guò)程中24h肝細(xì)胞UCP2表達(dá)最多,隨肝的再生逐漸降低。 3. UCP2表達(dá)與細(xì)胞增殖、線(xiàn)粒體膜電位之間存在顯著的正相關(guān)。肝細(xì)胞增殖和線(xiàn)粒體膜電位之間也存在顯著的正相關(guān)。 4. UCP2可通過(guò)質(zhì)子回漏適當(dāng)降低線(xiàn)粒體較高的膜電位,限制ROS堆積。
【圖文】：

圖 1 肝切后不同時(shí)間點(diǎn)的再生肝生長(zhǎng)變化s of ratio of regenerating liver and body weight at different time point after PH SH group,#P < 0.05 vs. 96h after PH group. n=5.切后再生肝組織形態(tài)學(xué)改變色結(jié)果顯示，假手術(shù)組肝細(xì)胞在中央靜脈周?chē)史派錉钆帕校笮≌�，罕�?jiàn)核分裂。肝切后 24h 和 48h 肝細(xì)胞處于增殖、胞體積、核變大，核分裂急劇增加；中央靜脈擴(kuò)張，靜脈周?chē)帕休^緊密（圖 2B 和圖 2C 所示）。肝切后 72h 中央靜脈周未排列好，條索狀排列不明顯（圖 2D）。肝切 96h 中央靜脈周構(gòu)排列成索狀，細(xì)胞體積、核大小正常，，偶見(jiàn)核分裂（圖 2E）后 24h 處于再生初期，至 96h 處于肝再生末期，殘余肝已再生

圖 2 肝切后不同時(shí)間點(diǎn)的再生肝組織形態(tài)學(xué)變化 200×Fig.2.Morphological changes of the regenerating liver after PH in rats. 200×肝切后不同時(shí)間點(diǎn)血清白蛋白水平變化圖 3 肝切后不同時(shí)間點(diǎn)血清白蛋白含量的改變 (n=5)ig.3. Changes of serum albumin contents in the regenerating liver after PH in r
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R33

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2526206