【摘要】：近年來受到人口流動性加大、人口老齡化、過分依賴卡介苗、人免疫缺陷病毒(HIV)與結核分支桿菌共感染、毒品及女性吸煙等諸多因素的影響,結核病死灰復燃,全球呈大回升之勢。結核分支桿菌耐藥性的產(chǎn)生和傳播更加劇了結核病的流行。作為標準化療的一線藥物,利福平和異煙肼在結核病的治療中發(fā)揮了重要的作用。然而,由于對這兩種藥物耐藥株的產(chǎn)生使其聯(lián)合治療的有效率降低到77%�？焖�、準確的檢測菌株的耐藥情況不僅有助于選擇最適的治療方案繼而提高治療效果,而且有助于阻止耐藥菌株的傳播,因而具有非常重要的意義。研究表明,異煙肼耐藥株的產(chǎn)生是由katG、inhA、kasA、ahpC、ndh等多基因控制的。其中,60%-70%的耐藥株是由于katG基因第315位密碼子突變所致,且這一突變與高耐藥量密切相關。因此,katG基因是異煙肼耐藥性檢測的首選基因。利福平的耐藥機制主要是由于編碼RNA多聚酶β-亞基的rpoB基因發(fā)生突變,導致利福平無法與RNA聚合酶結合,引起結核分支桿菌耐藥。約有90%～95%的利福平耐藥株存在rpoB基因的突變,且均集中在編碼511-533位共23個氨基酸的69bp核心突變區(qū),因此,通過對該區(qū)域基因序列的分析可以檢測對利福平的耐藥性。而在各個國家和地區(qū),這些位點突變的幾率均有差異,在我國,最近一篇文獻報道,在利福平耐藥的結核分支桿菌中,526位突變占40%,531位突變占41%,516位突變僅占4%。 我國結核分支桿菌耐多藥情況同樣令人擔憂:初始耐藥率為28.1%,繼發(fā)耐藥率為41.1%,并且均以耐異煙肼、利福平一線藥物為主,耐多藥(MDR)現(xiàn)象嚴重,所以耐藥性問題己構成了對結核病控制規(guī)劃的嚴重威脅。因此對抗結核藥物耐藥性進行系統(tǒng)研究和檢測,建立先進的耐藥性測定方法,以指導結核病的防治具有十分重要的現(xiàn)實意義。 開展這方面的研究,準確,全面的檢測katG、rpoB基因突變十分必要。目前已有文獻報道多種分子生物學檢測方法用于檢測這兩個基因的突變,如SSCP法,RFLP法,實時PCR法,線性探針雜交法:這些方法都有自身的優(yōu)缺點,且大部分不能同時對katG、rpoB基因突變進行撿測。目前,國際上已有商業(yè)化的INNO-LiPA Rif TB檢測試劑盒(比利時Innogenetics NN公司)可以檢測出rpoB基因第531位、第526位四種耐藥突變,具有簡便、快捷,特異性、敏感性較強的特點,臨床指導用藥效果良
【圖文】：

圖139#樣本的DNA測序結果注:用Pl引物進行單鏈測序，315位突變處用下劃線表示，為gac一aac突變，氨基酸由Ser突變?yōu)門hr。S匆naIG:599A:599TBD3T嘆B)口卜1.n優(yōu)白H付以幻7尸d川51125ot27印:179C:516Pk11工(:1071內弟，Of，入拍3If12’舊，，’14:07以幻3ff12’唱礦:955S伸cl叩:，.03次，.033)

R質粒PRC產(chǎn)物在65℃的條件下與膜條在雜交爐中雜交:克隆katG基因3巧位發(fā)生AGC~ACC突變的質粒條在顯色液中顯色的時間為Zmni雜交的最適溫度，以降低非特異性雜交。用R應該是能與PRC產(chǎn)物雜交的R探針顯色，而其都不能與CPR擴增產(chǎn)物雜交，因而都不能顯色。GCATS探針的序列為ACGCGACCAGCAGCG(匯AT，用R堿基用黑體標出。設計51、Rl探針的目的主要片中非特異性明顯，須進一步提高雜交的溫度。5R51RIS探針為
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R346

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 王文 ,潘衛(wèi) ,戚中田 ,金維榮 ,嚴然 ,蘇蓓 ,翁心華 ,陳澍 ,張文宏 ,盧洪洲;逆向點雜交方法檢測耐利福平結核分支桿菌rpoB基因突變[J];中華結核和呼吸雜志;2002年10期

2 吳雪瓊,張俊仙,胡忠義,莊玉輝,靳安佳,張曉剛,李國利;ahpC基因突變與結核分支桿菌耐異煙肼的研究[J];中華結核和呼吸雜志;1998年12期

本文編號：2520152