【摘要】：本文通過離體原代培養(yǎng)的小鼠脾臟B淋巴細(xì)胞和小鼠為實(shí)驗(yàn)對象,運(yùn)用細(xì)胞培養(yǎng)、流式細(xì)胞分析、激光共聚焦顯微鏡分析等免疫學(xué)和細(xì)胞學(xué)技術(shù),綜合研究和觀察了hsBLys在離體和在體條件下對B淋巴細(xì)胞的增殖、存活和分化的活性作用及其胞內(nèi)Ca~(2+)信號變化,從多個角度探討了hsBLyS對免疫細(xì)胞特別是B淋巴細(xì)胞的發(fā)育分化乃至整體免疫系統(tǒng)的調(diào)控作用及其作用機(jī)制。結(jié)果如下: 1 hsBLyS對離體脾B淋巴細(xì)胞增殖及存活的影響 用帶有抗CD19的磁珠分離脾臟的B淋巴細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度至1×10~5個/ml,適應(yīng)性培養(yǎng)4h后加入hsBLyS或/和anti-IgM的不同濃度的工作液,繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后MTT法檢測光吸收值。結(jié)果表明:hsBLys單刺激能夠誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖,且hsBLyS在0.5-2μg/ml濃度范圍內(nèi)隨著濃度升高而加強(qiáng);hsBLyS+anti-IgM共刺激脾臟B細(xì)胞雖沒有增殖,但進(jìn)一步在LPS刺激后表現(xiàn)出增殖明顯升高,其刺激指數(shù)極顯著高于對照組:hsBLyS在體外可以延長B淋巴細(xì)胞的存活時間。提示:hsBLyS能夠誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的脾臟B淋巴細(xì)胞的存活和增殖,hsBLyS+anti-IgM共同作用能增強(qiáng)B淋巴細(xì)胞免疫活性。 2 hsBLyS單體及三聚體對離體脾B淋巴細(xì)胞作用比較 用帶有抗CD19的磁珠分離脾臟的B淋巴細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度至1×10~5個/ml,適應(yīng)性培養(yǎng)4h后加入hsBLyS單體或三聚體以及anti-IgM的不同濃度的工作液,繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后MTT法檢測光吸收值。結(jié)果表明:加入hsBLvS三聚體培養(yǎng)的B細(xì)胞的增殖活性高于或顯著高于對照組,而加入hsBLvS單體的B細(xì)胞與對照組相比變化不明顯。提示:比較hsBLyS單體和三聚體對B淋巴細(xì)胞增殖變化,確認(rèn)hsBLyS主要是以三聚體形式發(fā)揮生物學(xué)活性。 3 hsBLyS對離體脾臟B淋巴細(xì)胞分化的作用 實(shí)驗(yàn)分兩個系列。系列一:將分離的脾臟細(xì)胞懸液加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板,隨機(jī)分為對照組、2.5μg/ml hsBLyS組、2.5μg/ml anti-IgM組和2.5μg/mlhsBLyS+2.5μg/ml anti-IgM組,每組3個平行孔,分別加入PBS、hsBLyS和/或anti-IgM工作液,培養(yǎng)72h。系列二:分組同系列一,只是在加入工作液培養(yǎng)24h之后,吸去各孔上清再加入LPS繼續(xù)培養(yǎng)48h。培養(yǎng)結(jié)束后,各孔加入anti-CD45R/B220和anti-CD21單克隆熒光抗體標(biāo)記,流式細(xì)胞儀分析hsBLyS對B淋巴細(xì)胞分化的影響。結(jié)果表明:加入hsBLyS誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞總體數(shù)量明顯高于對照組;B220~+CD21~(lo)B淋巴細(xì)胞(T1 B淋巴細(xì)胞)數(shù)量雖略高于對照
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圖片說明： 細(xì)胞和不成熟B細(xì)胞的分化是抗原非依賴的，其分化過程在骨髓中進(jìn)行。抗原依賴階段是指成熟B細(xì)胞在抗原刺激后活化，并繼續(xù)分化為合成和分泌抗體的漿細(xì)胞，這個階段的分化主要是在外周免疫器官中進(jìn)行的(圖1一1)l’，2一5]。圖1一IB細(xì)胞的成熟過程:在抗原非依賴階段，骨髓中的B細(xì)胞開始表達(dá)gIM和gID;然后這些B細(xì)胞遷移至脾臟中繼續(xù)發(fā)育，其中只有10%的B細(xì)胞得以從陽性刪除中存活。B細(xì)胞在脾臟中發(fā)育成熟，，如果沒有可溶性抗原和TH細(xì)胞的共同作用，這些B細(xì)胞將因?yàn)闊o法活化而只能生存很短時間。一旦得到活化，活化的B細(xì)胞將在二級淋巴器官中增殖，分化為漿細(xì)胞和記憶B細(xì)胞
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圖片說明： 、夕圖1一ZB細(xì)胞過渡形態(tài)的分化。IM:不成熟B細(xì)胞(immaLtUeBeesll);Tl:immaLt珍ertansitionaltyPel:T2二InunaturertansitionalytPeZ;MZ:marginalzone;FO:ofllieular;Ae:activatedBeell;M:memoyrBeell:PC:PlasmaeellZB細(xì)胞的活化成熟B細(xì)胞的活化、增殖需要抗原的誘導(dǎo)。根據(jù)誘導(dǎo)抗原類型的不同，B細(xì)胞可呈現(xiàn)不同的活化方式(表1一l)[，o，川。表1一1Prope-tliesofT一cell刁ePendentandT一eell一indePendentantigcnsPorPerytTDantigensTlantigens介Pel竹PeZChemiealnatureSolublePorteinYesYesyesNosotyPeswitchingB朗terialCell一walleomPonenst(e.g.，LPS)N0PolymeriePoretninatigens;cPausarlpolyasceharidesLimited000NNNAffiniytmUatartionImmunologiememoyrPolyelonalaetivationN0N0Yesh(ihgdose).21TD一Ag誘導(dǎo)的活化自然情況下，多數(shù)抗原是TD一Ag(Teelldependentnati羅ne)，所以B細(xì)胞活化多需TH細(xì)胞的輔助。B細(xì)胞吞噬能力較弱，但其表面gI是高親和力的抗原受體
【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2513643