發(fā)布時間：2019-05-18 02:59

【摘要】：目的 建立穩(wěn)定分泌鼠抗人B7-2分子單克隆抗體的雜交瘤細胞株；研究抗體的生物學特性及功能；建立人可溶性B7-2分子的ELISA檢測方法。 方法 應用B細胞雜交瘤技術建立分泌抗人B7-2單抗的雜交瘤細胞株；快速定性試紙法鑒定單抗的亞類；體內誘生腹水法制備單抗；免疫親和層析法純化抗體；間接免疫熒光法分析單抗對細胞膜型B7-2分子的識別；MTT法檢測單抗對Daudi的生長抑制和對PBTCs增殖的抑制作用；競爭抑制實驗分析單抗識別的抗原位點。生物素標記抗體后建立可溶性B7-2分子的ELISA檢測方法。 結果 獲取一株穩(wěn)定分泌抗人B7-2分子單抗的雜交瘤，命名為6A5；快速定性試紙法鑒定6A5屬小鼠IgG1亞類及κ型；經(jīng)體內誘生腹水法制備單抗，小鼠腹水形成的陽性率約為80％，腹水的收獲量平均為5.9ml／只小鼠；經(jīng)免疫親和層析法純化，腹水中抗體蛋白的得率為1.1mg／ml；單抗6A5與L929-B7-2、PBTCs、Raji、MCF-7和Daudi的陽性結合率分別為99.9％、4.6％、90.6％、79.6％和99.1％；將6A5(終濃度為5μg／ml)加入到Daudi細胞的培養(yǎng)體系中，，經(jīng)顯微鏡觀察及MTT法分析，6A5對Daudi細胞的生長具有抑制作用。以絲裂霉素處理的L929-B7-2為刺激細胞，PBTCs為反應細胞，加入6A5共同培養(yǎng)；經(jīng)MTT法分析，6A5能阻斷B7-2介導的協(xié)同刺激信號，抑制PBTCs增殖；通過Biotin標記B7-2單抗，建立了人sB7-2分子的ELISA檢測方法，能夠對血清標本及細胞裂解液中的sB7-2進行定量分析。 結論 本研究獲取的功能性B7-2單抗及建立的sB7-2的檢測方法在該分子的基礎和應
[Abstract]:Objective to establish a hybridoma cell line stably secreting monoclonal antibody against human B7 鈮

本文編號：2479613