【摘要】： 目的:膽囊收縮素(cholecystokinin, CCK)是廣泛分布于體內(nèi)多個(gè)系統(tǒng)的神經(jīng)肽,作為神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)發(fā)揮重要作用,具有多種生物學(xué)功能,如調(diào)節(jié)攝食、焦慮、記憶等。我室以往的研究發(fā)現(xiàn),八肽CCK(CCK-8)具有一定的免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用,體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),CCK-8可抑制LPS誘導(dǎo)的大鼠PIMs的NF-κB活性,導(dǎo)致PIMs對(duì)LPS的敏感性降低,從而抑制脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)誘生促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6。 IL-12是90年代初命名的白細(xì)胞介素家族新成員,在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)中起著重要的作用。它能誘導(dǎo)NK細(xì)胞和T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子(主要是γ干擾素),促進(jìn)NK細(xì)胞及細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的形成并提高其細(xì)胞毒性,誘導(dǎo)Th1細(xì)胞分化并抑制Th2細(xì)胞分化,它甚至可以使已建立的Th2型為主的反應(yīng)向Th1型轉(zhuǎn)變。IL-12由p35和p40兩個(gè)亞單位組成,p35基因在多種細(xì)胞中表達(dá),而p40基因的表達(dá)只限于具有抗原提呈功能的吞噬細(xì)胞,因此,p40基因被認(rèn)為是IL-12表達(dá)的調(diào)節(jié)亞基。IL-12在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)和抗腫瘤中的作用,使人們對(duì)IL-12基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生了濃厚的興趣。LPS/IFNγ誘導(dǎo)p40基因表達(dá)的功能性啟動(dòng)子區(qū)域已被鑒定。這一區(qū)域的-132/-122含有NF-κB結(jié)合位點(diǎn),而-211/-207含有Ets-2元件, NF-κB是LPS/IFNγ刺激后導(dǎo)致巨噬細(xì)胞IL-12p40轉(zhuǎn)錄發(fā)生最大效應(yīng)的主要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。有研究表明血管活性腸肽(VIP)和垂體腺苷酸激活多肽(PACAP)抑制IFNγ和LPS刺激的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-12。但同屬神經(jīng)肽的CCK是否對(duì)IL-12的分泌具有調(diào)節(jié)作用,如果具有調(diào)節(jié)作用其細(xì)胞內(nèi)機(jī)制如何尚未見(jiàn)研究報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)將觀察CCK-8對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠分泌IL-12的影響,以探討CCK-8調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡的作用是否與IL-12有關(guān)。 方法:健康BALb/C雌性小鼠108只,隨機(jī)分為6組:(1)生理鹽水對(duì)照組(NS組):腹腔注射生理鹽水0.3ml。(2)LPS組:腹腔注射LPS 5mg/kg(LPS 1mg/ml, 0.1ml/20g);(3)LPS+CCK組:腹腔注射CCK-8 5nmol(CCK-8 1mg/L, 0.1ml/20g),10 min后腹腔注射LPS 5mg/kg(LPS 1mg/ml, 0.1ml/20g);(4)單獨(dú)CCK組:腹腔注射CCK 5nmo(lCCK-8 1mg/L, 0.1ml/20g);(5)CR1409組:腹腔注射CR-1409 5μg/kg(CR-14091mg/L, 0.1ml/20g),30 min后腹腔注射CCK-8 5nmol ( CCK-8 1mg/L, 0.1ml/20g),10 min后腹腔注射LPS 5mg/kg(LPS 1mg/ml, 0.1ml/20g);(6)CR2945組:腹腔注射CR-2945 5μg/kg(CR-2945 1mg/L, 0.1ml/20g),30 min后腹腔注射CCK-8 5 nmol(CCK-8 1mg/L, 0.1ml/20g),10 min后腹腔注射LPS 5mg/kg(LPS 1mg/ml, 0.1ml/20g)。肺、脾凍存于液氮中,留置血清于-70℃。用ELISA法檢測(cè)血清、肺、脾組織中IL-12p40、p70的表達(dá)。Western Blot方法檢測(cè)IκB和p-IκB、p38和p-p38的表達(dá)。觀察CCK-8對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠IκB、p38磷酸化水平的影響。EMSA方法檢測(cè)各組小鼠肺、脾組織NF-κB/DNA結(jié)合活性。 結(jié)果: 1 CCK-8對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠血清、肺、脾組織IL-12 p40、p70蛋白表達(dá)的影響:小鼠血清、肺、脾組織IL-12 p40濃度LPS組(207.89±53.31 ng/L、111.16±9.55 ng/L、78.3±8.35 ng/L)均較NS組(46.02±15.62ng/L、49.10±6.24ng/L、46.32±8.41ng/L)增高(P0.01),LPS+CCK組(327.74±63.08ng/L、174.56±10.82ng/L、108.41±10.21ng/L)IL-12p40濃度較LPS組增高(P0.01), IL-12 p40濃度CR1409組(293.29±118.63ng/L、160.04±4.30 ng/L、93.08±5.02ng/L)、CR2945組(212.88±52.81ng/L、143.58±8.53ng/L、82.16±4.02ng/L)較LPS+CCK組降低(P0.05);小鼠血清、肺、脾組織IL-12p70濃度LPS組(145.64±3.84ng/L、47.01±3.19ng/L、85.69±6.00ng/L)均較NS組(17.44±4.61ng/L、26.94±7.59ng/L、44.54±5.51ng/L)增高( P0.01), LPS+CCK組(240.37±45.72ng/L、86.09±6.74ng/L、111.85±15.97ng/L)IL-12 p70濃度較LPS組增高(P0.01), IL-12p70濃度CR1409組( 160.93±19.21ng/L、67.59±7.32ng/L、97.24±6.19ng/L )、CR2945組( 165.54±14.70ng/L、52.34±8.96ng/L、90.02±6.35ng/L)較LPS+CCK組降低(P0.05)。 2 CCK-8對(duì)脂多糖誘導(dǎo)小鼠肺、脾組織IκB、p38磷酸化水平和NF-κB/DNA結(jié)合活性的影響:小鼠在給予生理鹽水、脂多糖、CCK-8及CCK受體拮抗劑后肺、脾組織總的IκB、p38表達(dá)在各組之間有所不同,但各組之間均無(wú)顯著性差異(P0.05);小鼠肺、脾組織pIκB蛋白表達(dá)LPS組(0.80±0.28)較NS組(0.32±0.04)升高(P0.01);LPS+CCK組(0.52±0.33)pIκB蛋白表達(dá)低于LPS組(P0.01);與LPS+CCK組相比,CR1409組(0.59±0.02)、CR2945組(0.75±0.07)pIκB蛋白表達(dá)水平升高,CR2945組較CR1409組升高明顯;小鼠肺、脾組織p-p38蛋白表達(dá)LPS組(0.40±0.3)較NS組(0.17±0.03)升高(P0.01);LPS+CCK組(0.56±0.03)p- p38蛋白表達(dá)高于LPS組(0.40±0.03)(P0.05);與LPS+CCK組相比,CR1409組(0.45±0.04)、CR2945組(0.43±0.03)p-p38蛋白表達(dá)水平降低,CR2945組較CR1409組降低明顯。小鼠肺、脾組織NF-κB/DNA結(jié)合活性LPS組(59496.33±1332.43)較NS組(7830.33±1057.92)升高(P 0.01) ; LPS+CCK組(30297.03±1083.77)與LPS組相比NF-κB/DNA結(jié)合活性降低(P0.01);與LPS+CCK組相比,CR1409組(39358.67±564.96)、CR2945組(49615.03±1200.15)小鼠肺、脾組織NF-κB/DNA結(jié)合活性升高,CR2945組較CR1409組升高明顯。 結(jié)論:CCK-8可促進(jìn)脂多糖誘導(dǎo)小鼠血清、肺、脾組織IL-12p40、p70表達(dá)的異常增高,抑制IκB磷酸化水平及NF-κB/DNA結(jié)合活性的異常增高,而增加了p38磷酸化水平,CCK-8可能通過(guò)增加p38磷酸化水平而促進(jìn)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠血清、肺、脾組織IL-12p40、p70表達(dá)的異常增高。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2326536