【摘要】： 目的觀察弓形蟲排泄分泌抗原(excreted/secreted antigens, ESA)與可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)聯(lián)合滴鼻免疫小鼠誘導(dǎo)的黏膜及系統(tǒng)免疫應(yīng)答的能力,探討其誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的機(jī)制,為弓形蟲黏膜疫苗復(fù)合抗原的篩選提供初步的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法本實(shí)驗(yàn)分三部分:第一部分觀察弓形蟲感染小鼠不同時(shí)間從腹水中獲取的ESA滴鼻免疫小鼠誘導(dǎo)黏膜和系統(tǒng)免疫應(yīng)答的效果,確定獲取ESA的適宜時(shí)間。分別用弓形蟲感染第0h、6h、12h、24h、36h、48h和60h無菌收集的腹腔液中獲取的ESA以20μg/只或PBS以20μl/只滴鼻免疫10只小鼠2次,間隔14天。觀察小鼠狀況并記錄體重,末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠,ELISA法檢測(cè)血清弓形蟲特異性IgG、小腸沖洗液sIgA抗體水平,分離脾淋巴細(xì)胞、腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(intestinal intraepithelial lymphocytes, iIEL)及腸系膜淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)并計(jì)數(shù)。 第二部分觀察以不同劑量弓形蟲感染小鼠48h獲取的ESA滴鼻免疫小鼠誘導(dǎo)黏膜及系統(tǒng)免疫應(yīng)答的效果,確定合適的ESA鼻內(nèi)接種劑量。分別用5μg、10μg、20μg和30μg ESA/只或PBS 20μl/只滴鼻免疫8只小鼠2次,間隔14天。觀察小鼠狀況,于末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠,ELISA法檢測(cè)鼻咽沖洗液弓形蟲特異性sIgA、小腸沖洗液sIgA、血清IgG抗體水平,分離iIEL和MLNL及脾淋巴細(xì)胞并計(jì)數(shù)。 第三部分觀察弓形蟲排泄分泌抗原與可溶性速殖子抗原聯(lián)合或單獨(dú)滴鼻免疫小鼠誘導(dǎo)黏膜及系統(tǒng)免疫應(yīng)答的效果,篩選弓形蟲復(fù)合黏膜疫苗候選抗原成分。分別用30μg ESA、20μg STAg、25μg聯(lián)合抗原(15μg ESA加10μgSTAg)/只或PBS 20μl/只滴鼻免疫10只小鼠2次,間隔14天。觀察小鼠健康狀況并記錄體重,于末次免疫后第14天頸椎脫臼處死小鼠,ELISA法檢測(cè)小腸沖洗液弓形蟲特異性sIgA、血清IgG抗體水平,分離iIEL和脾淋巴細(xì)胞并計(jì)數(shù)。 結(jié)果不同時(shí)相ESA滴鼻免疫小鼠后,除60h組外,其它實(shí)驗(yàn)組及PBS組小鼠健康狀況良好,體重變化隨時(shí)間均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。60h組小鼠狀態(tài)欠佳,體重增長較其它實(shí)驗(yàn)組及PBS組緩慢(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組血清和黏膜特異性抗體水平升高,MLNL、iIEL和脾淋巴細(xì)胞發(fā)生增殖性應(yīng)答。48h組和60組血清IgG、小腸沖洗液sIgA水平及iIEL、MLNL和脾淋巴細(xì)胞數(shù)量均明顯高于除36h組外的其他實(shí)驗(yàn)組及PBS組(P0.01)。36h組小腸沖洗液sIgA水平及MLNL數(shù)量明顯高于0h組和PBS組(P0.05)。 不同劑量ESA滴鼻免疫小鼠后,各組小鼠健康狀況良好。隨鼻內(nèi)免疫ESA劑量的增加,實(shí)驗(yàn)組特異性抗體水平不同程度的升高,MLNL、iIEL及脾淋巴細(xì)胞也發(fā)生不同程度
[Abstract]:Objective to observe the ability of excreted/secreted antigens, ESA) and (soluble tachyzoite antigen, STAg) to induce mucosal and systemic immune response in mice and to explore the mechanism of immune response induced by Toxoplasma gondii excretory secretory antigen (excreted/secreted antigens, ESA) and soluble tachyzoite antigen (soluble tachyzoite antigen, STAg). To provide a preliminary theoretical and experimental basis for screening complex antigen of Toxoplasma mucosal vaccine. Methods the experiment was divided into three parts: the first part was to observe the induction of mucosal and systemic immune response in mice inoculated with ESA from ascites at different times, and to determine the appropriate time for obtaining ESA in mice infected with Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii). 10 mice were immunized twice with Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii) infection at 20 渭 g / mouse or PBS with 20 渭 l / a intranasal drip for 48 h and 60 h, respectively, after infection with Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii) for 12 hours and 24 hours for 36 hours and 60 hours, respectively, with an interval of 14 days. The mice were killed by cervical dislocations on the 14th day after the last immunization. ELISA assay was used to detect the level of sIgA antibody to Toxoplasma gondii specific IgG, small intestinal irrigation fluid, and to isolate spleen lymphocytes and intestinal intraepithelial lymphocytes (intestinal intraepithelial lymphocytes,). IIEL) and mesenteric lymph node lymphocyte (mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL) were counted. The second part was to observe the induction of mucosal and systemic immune response of mice immunized with ESA nasal drip with different doses of Toxoplasma gondii for 48 h, and to determine the appropriate dose of intranasal ESA inoculation. 8 mice were immunized with 5 渭 g 10 渭 g ESA/ or 30 渭 g ESA/ or 20 渭 l / PBS for 14 days. The mice were killed on the 14th day after the last immunization. The serum IgG antibody levels of Toxoplasma gondii specific sIgA, small intestinal lavage fluid (sIgA,), iIEL and MLNL and splenic lymphocytes were detected by ELISA method. The third part was to observe the effect of Toxoplasma gondii excretory secretory antigen and soluble tachyzoite antigen on mucosal and systemic immune responses of mice immunized with Toxoplasma gondii excretory secretory antigen and soluble tachyzoite antigen alone. 10 mice were immunized twice with 30 渭 g ESA,20 渭 g STAg,25 渭 g combined antigen (15 渭 g ESA plus 10 渭 gSTAg) or PBS 20 渭 l / mouse for 14 days. The mice were killed on the 14th day after the last immunization. The serum IgG antibody level of Toxoplasma gondii specific sIgA, was detected by ELISA method, and the iIEL and spleen lymphocytes were separated and counted. Results after nasal immunization with ESA at different time stages, the mice in the other experimental and PBS groups were in good health condition except for 60 h group, and the body weight change showed an increasing trend with time, and the mice in 60 h group were not in good condition. Weight gain was slower than other experimental groups and PBS group (P0.05). The levels of serum and mucosal specific antibodies increased, and MLNL,iIEL and splenic lymphocytes developed proliferative response in experimental group. 48 h group and 60 group of serum IgG, small bowel lavage fluid sIgA level and iIEL, The number of MLNL and splenic lymphocytes were significantly higher than those of other experimental groups and PBS groups except 36h group (P0.01). The sIgA level and MLNL number of small intestinal lavage fluid in 36h group were significantly higher than those in 0h group and PBS group (P0.05). After nasal immunization with different doses of ESA, the mice in each group were in good health. With the increase of the dose of intranasal immunized ESA, the level of specific antibody in the experimental group increased in different degrees, and MLNL,iIEL and splenic lymphocytes also occurred in different degrees.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2324263