發(fā)布時間：2018-10-25 14:06

【摘要】：本實驗室前期的工作中，在人睪丸cDNA microarray差異雜交的基礎上，克隆了一個新的成人睪丸高表達的基因，命名為NYD-SP16。序列分析顯示NYD-SP16與小鼠睪丸基因AK006554的核苷酸序列及其編碼蛋白BAB24651的氨基酸序列有高度同源性(＞80％)，表明NYD-SP16是一條人-小鼠同源基因。結構域分析推測NYD-SP16蛋白含有一個跨膜結構域，前期實驗證實NYD-SP16蛋白是一種膜蛋白，對于睪丸發(fā)育和精子發(fā)生起著重要作用。 在NYD-SP16蛋白是人-鼠高度同源的基礎上，本研究采用小鼠動物模型對NYD-SP16蛋白做了進一步的功能研究。首先原核表達NYD-SP16重組蛋白，純化后免疫小鼠制備了多克隆抗體�？贵w在小鼠睪丸和精子的膜蛋白的Western Blot中均顯示有特異條帶，說明此抗體能識別小鼠同源蛋白。在小鼠睪丸的免疫組化中，NYD-SP16蛋白主要分布于長形精子細胞的頭側核周胞漿內。在小鼠精子其蛋白的免疫定位主要位于精子頭部的頂體區(qū)域，，當精子處于不同功能狀態(tài)時，CTC和免疫熒光復染顯示NYD-SP16的表達在獲能前后沒有明顯改變，但在頂體反應后明顯減弱，近乎于基本消失。為檢測NYD-SP16蛋白在小鼠精子獲能及頂體反應中的作用，進行了在體外
[Abstract]:On the basis of differential hybridization of human testis cDNA microarray, a novel adult testis overexpression gene named NYD-SP16. was cloned in our laboratory. Sequence analysis showed that NYD-SP16 was highly homologous to the nucleotide sequence of mouse testicular gene AK006554 and the amino acid sequence of its encoding protein BAB24651 (> 80%), indicating that NYD-SP16 was a homologous gene between human and mouse. Domain analysis suggested that NYD-SP16 protein contained a transmembrane domain. Previous studies confirmed that NYD-SP16 protein is a membrane protein and plays an important role in testicular development and spermatogenesis. On the basis of the high homology of NYD-SP16 protein between human and mouse, the function of NYD-SP16 protein was further studied by using mouse animal model. Firstly, NYD-SP16 recombinant protein was expressed in prokaryotic cells, and the polyclonal antibody was prepared by immunizing mice. There were specific bands in the Western Blot of membrane protein of mouse testis and spermatozoa, which indicated that the antibody could recognize mouse homologous protein. In the immunohistochemical staining of mouse testis, NYD-SP16 protein was mainly distributed in the perinuclear cytoplasm of long sperm cells. In mouse spermatozoa, the immunological localization of its protein was mainly located in the acrosome region of the sperm head. When the sperm was in different functional states, CTC and immunofluorescence restaining showed that the expression of NYD-SP16 did not change significantly before and after capacitation, but decreased significantly after acrosome reaction. Almost disappeared. In order to detect the role of NYD-SP16 protein in mouse sperm capacitation and acrosome reaction, in vitro, the effect of NYD-SP16 protein on spermatozoa capacitation and acrosome reaction was studied.
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R341

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