發(fā)布時間：2018-09-13 07:02

【摘要】：目的:FK506結(jié)合蛋白12.6(FK506 binding protein 12.6,FKBP12.6),屬于FKBP蛋白家族成員之一,是免疫抑制劑FK506的胞內(nèi)作用靶點(diǎn)。FKBP12.6由108個氨基酸組成,分子量為12.6KD,生理狀態(tài)下能夠與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和肌漿網(wǎng)上的RyR2結(jié)合,穩(wěn)定鈣離子通道,進(jìn)而減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和肌漿網(wǎng)中鈣離子外泄;同時FKBP12.6與FK506結(jié)合,則可抑制鈣調(diào)磷酸酶(CaN)活性,從而抑制免疫反應(yīng)。FKBP12.6主要分布于心肌、腦組織和平滑肌等。FKBP12.6在中樞神經(jīng)系統(tǒng)有著廣泛的表達(dá),包括一些與學(xué)習(xí)記憶相關(guān)的腦區(qū),如海馬、杏仁核;然而,其在學(xué)習(xí)記憶方面的功能還不清楚。本文旨在研究FKBP12.6敲除對新物體識別記憶、物體位置識別記憶及條件恐懼記憶的影響,并從電生理和蛋白表達(dá)方面探討其可能的作用機(jī)制。方法:1.對小鼠尾部DNA進(jìn)行基因鑒定,判斷其是否成功敲除FKBP12.6基因。2.依據(jù)小鼠對新事物的探究特性建立實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?研究FKBP12.6敲除小鼠和WT(野生型)小鼠在新物體識別記憶和物體位置識別記憶上的差異。3.通過依據(jù)巴甫洛夫條件反射原理建立的恐懼記憶測試系統(tǒng),研究FKBP12.6敲除小鼠和WT小鼠在條件恐懼記憶上的差異。4.通過膜片鉗技術(shù),研究FKBP12.6敲除小鼠和WT小鼠杏仁核神經(jīng)元在電生理性質(zhì)上的差異。5.通過免疫組化方法,研究FKBP12.6敲除小鼠和WT小鼠記憶相關(guān)腦區(qū)c-fos蛋白表達(dá)水平的差異。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)中所用的小鼠確定已成功敲除FKBP12.6基因。2.與WT小鼠相比,FKBP12.6敲除小鼠的新物體識別記憶、物體位置識別記憶和條件恐懼記憶均下降。3.與WT小鼠相比,FKBP12.6敲除小鼠腦部杏仁核區(qū)域微小抑制性突觸后電位(miniature inhibitory excitatory post synaptic potential,mIPSP)的頻率沒有顯著變化,微小興奮性突觸后電位(miniature excitatory post synaptic potential,mEPSP)的頻率顯著下降。4.與WT小鼠相比,FKBP12.6敲除小鼠腦部杏仁核區(qū)域c-fos蛋白表達(dá)水平明顯下降。結(jié)論:FKBP12.6基因敲除會損傷小鼠的新物體識別記憶、物體位置識別記憶和條件恐懼記憶;初步結(jié)果表明杏仁核mEPSP和c-fos蛋白表達(dá)水平的變化可能與條件恐懼記憶的損傷有關(guān)。
[Abstract]:Objective: FK506 binding protein 12.6 (FK506 binding protein 12.6FKBP12.6), a member of FKBP protein family, is the intracellular target of immunosuppressant FK506. FKBP12.6 is composed of 108 amino acids and has a molecular weight of 12.6KD. in physiological state, it can bind to endoplasmic reticulum (ER) and sarcoplasmic reticulum (RyR2). Calcium channel can be stabilized to reduce the leakage of calcium ions in endoplasmic reticulum and sarcoplasmic reticulum, meanwhile, FKBP12.6 combined with FK506 can inhibit the activity of calmodulin (CaN), thus inhibit the immune response. FKBP12.6 mainly distributes in myocardium. FKBP12.6 is widely expressed in the central nervous system, including some brain regions related to learning and memory, such as hippocampus and amygdala, but its function in learning and memory is not clear. The purpose of this paper is to study the effects of FKBP12.6 knockout on new object recognition memory, object position recognition memory and conditional fear memory, and to explore the possible mechanism of FKBP12.6 knockout in terms of electrophysiology and protein expression. Method 1: 1. The mouse tail DNA gene was identified to determine whether it successfully knocked out the FKBP12.6 gene. 2. An experimental model was established to study the difference between FKBP12.6 knockout mice and WT mice in new object recognition memory and object position recognition memory. The fear memory test system based on Pavlov's conditioned reflex principle was established to study the difference of conditional fear memory between FKBP12.6 knockout mice and WT mice. The electrophysiological properties of amygdala neurons in FKBP12.6 knockout mice and WT mice were studied by patch clamp technique. The difference of c-fos protein expression in memory related brain region between FKBP12.6 knockout mice and WT mice was studied by immunohistochemical method. The result is 1: 1. The mice used in the experiment confirmed that they had successfully knocked out the FKBP12.6 gene. 2. 2. Compared with WT mice, the new object recognition memory, object position recognition memory and conditional fear memory of FKBP12.6 knockout mice decreased by .3. Compared with WT mice, the frequency of (miniature inhibitory excitatory post synaptic potential,mIPSP) in the amygdala region of FKBP12.6 knockout mice was not significantly changed, but the frequency of (miniature excitatory post synaptic potential,mEPSP) was significantly decreased by .4.The frequency of (miniature excitatory post synaptic potential,mEPSP in the brain of FKBP12.6 knockout mice was significantly lower than that of FKBP12.6 knockout mice. Compared with WT mice, the expression of c-fos protein in the amygdala of FKBP12.6 knockout mice decreased significantly. Conclusion the new object recognition memory, the object position recognition memory and the conditioned fear memory can be damaged by the knockout of the 1: FKBP12.6 gene, and the preliminary results indicate that the changes of mEPSP and c-fos protein expression levels in the amygdala may be related to the damage of conditioned fear memory.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R338.64

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