發(fā)布時(shí)間：2018-08-26 07:57

【摘要】：目的:利用不加任何誘導(dǎo)劑的懸浮培養(yǎng)法,體外誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞并檢測(cè)其分化效率。方法:人胚胎干細(xì)胞克隆用200U/mL膠原酶Ⅳ,370C處理10min后,挑起克隆碎片轉(zhuǎn)移到低黏附性培養(yǎng)皿中懸浮培養(yǎng)以形成EB(擬胚體),4d后將EB轉(zhuǎn)移到基質(zhì)膠處理過的6孔板中貼壁培養(yǎng)(1-3EBs/cm2),顯微鏡下觀察記錄出現(xiàn)跳動(dòng)心肌細(xì)胞的時(shí)間和跳動(dòng)頻率,并計(jì)算跳動(dòng)克隆百分比,24孔板一組,共記錄4組96孔;免疫熒光染色檢測(cè)心肌細(xì)胞特異標(biāo)志物cTnT;膜片鉗實(shí)驗(yàn)檢測(cè)心肌細(xì)胞自發(fā)性動(dòng)作電位;跳動(dòng)心肌細(xì)胞經(jīng)過24h缺氧刺激后,用凋亡試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡比例。結(jié)果:在懸浮培養(yǎng)14d左右開始出現(xiàn)大量的自發(fā)跳動(dòng)心肌細(xì)胞,分化出現(xiàn)自發(fā)跳動(dòng)心肌細(xì)胞的平均時(shí)間(13.9±0.9)d,百分比為20.8%,平均跳動(dòng)頻率為(63.8±5.6)次/min;跳動(dòng)心肌細(xì)胞cTnT染色陽(yáng)性;跳動(dòng)心肌細(xì)胞檢測(cè)到自發(fā)性動(dòng)作電位;跳動(dòng)心肌細(xì)胞缺氧24h的凋亡比例為(8.1±0.4)%。結(jié)論:不加誘導(dǎo)劑的懸浮培養(yǎng)可以誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞,分化效率達(dá)到20.8%,分化時(shí)間14d左右。為進(jìn)一步的干細(xì)胞移植治療動(dòng)物心肌梗死模型提供種子細(xì)胞。
[Abstract]:Aim: to induce human embryonic stem cells to differentiate into cardiomyocytes in vitro by suspension culture without any inducer. Methods: human embryonic stem cell clones were treated with 200U/mL collagenase 鈪，

本文編號(hào)：2204224