本文選題：細(xì)胞 + 受體��； 參考：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2006年博士論文

【摘要】： 缺乏特異性腫瘤抗原是實體腫瘤抗體免疫治療效果欠佳的重要原因;而γδT細(xì)胞能夠經(jīng)由其細(xì)胞受體(γδTCR)δ鏈的CDR3區(qū)(CDR3δ)廣泛地識別、進(jìn)而殺傷多種實體腫瘤細(xì)胞,比如卵巢癌。本試驗將抗體分子重鏈的CDR3(CDR3H)用CDR3δ替換以獲得γδT細(xì)胞的腫瘤識別能力,探索潛在的癌癥治療應(yīng)用。本文首先用將CDR3H被替換為CDR3δ的IgG重鏈表達(dá)載體轉(zhuǎn)染重鏈缺失型J558L骨髓瘤細(xì)胞,表達(dá)了抗體OT3Ab,其CDR3δ序列為本組報道的源自卵巢癌浸潤Vδ2T細(xì)胞的OT3序列。經(jīng)SDS-PAGE和Western Blotting驗證后,流式細(xì)胞術(shù)分析顯示OT3Ab能夠和卵巢癌細(xì)胞系SKOV3特異結(jié)合(57.1%,CDR3未替換的對照抗體4.42%),核素~(99m)Tc標(biāo)記OT3Ab后對接種SKOV3細(xì)胞的荷瘤裸鼠體內(nèi)顯像結(jié)果表明,OT3Ab能夠特異聚集于腫瘤組織。隨后本試驗把OT3Ab和白喉毒素通過化學(xué)偶聯(lián)的方法構(gòu)建免疫毒素OT3AbDT,經(jīng)免疫熒光顯示其結(jié)合腫瘤細(xì)胞能力依然保存后,進(jìn)行體內(nèi)外抗腫瘤的試驗治療。蛋白合成抑制試驗顯示OT3AbDT對SKOV3細(xì)胞的IC_(50)介于1-10μg/ml。在SKOV3皮下荷瘤裸鼠模型中,瘤內(nèi)注射OT3AbDT(13.8μg/次,每4天1次,共4次),荷瘤小鼠的腫瘤在16天后顯著減小,和PBS差異顯著。在更多種類的腫瘤皮下荷瘤模型中,包括人宮頸癌細(xì)胞系Hela、肝癌HepG2和直腸癌HR8348,尾靜脈注射的OT3AbDT(13.8μg/次)也表現(xiàn)出不同程度的腫瘤體積增長被抑制的效果。上述結(jié)果表明CDR3δ移植性抗體為腫瘤的靶向免疫治療提供了新的策略和工具。同時,本文也通過圓二色譜、分子動力學(xué)模擬對CDR3δ多肽的構(gòu)象進(jìn)行研究,為針對CDR3δ肽的研究提供必要的結(jié)構(gòu)信息。
[Abstract]:The lack of specific tumor antigen is an important reason for the poor immunotherapy of solid tumor antibodies, and 緯 未 T cells can be widely recognized by the CDR3 region (CDR3 未) of its cell receptor (緯 未 TCR) 未 chain, which can kill many solid tumor cells, such as ovarian cancer. In this study, CDR3 (CDR3H) of antibody molecular heavy chain was replaced with CDR3 未 to obtain the tumor recognition ability of 緯 未 T cells, and to explore the potential application of cancer therapy. In this paper, the IgG heavy chain expression vector of CDR3H was replaced with CDR3 未 and transfected into J558L myeloma cells, and the antibody OT3Abwas expressed. The CDR3 未 sequence was reported as OT3 sequence of ovarian cancer infiltrating V 未 2T cells. The results were confirmed by SDS-PAGE and Western blotting. Flow cytometry analysis showed that OT3Ab could specifically bind to ovarian cancer cell line SKOV3 (57.1% of the control antibody was not replaced by CDR3). In vivo imaging of nude mice inoculated with OT3Ab labeled with ~ (99m) Tc-labeled OT3Ab showed that OT3Ab could specifically concentrate in tumor tissue. Then the OT3Ab and diphtheria toxin were chemically coupled to construct the immunotoxin OT3AbDTT. After the immunofluorescence showed that OT3Ab was still preserved in combination with tumor cells, the anti-tumor therapy was carried out in vivo and in vitro. Protein synthesis inhibition test showed that the IC50 of OT3AbDT on SKOV3 cells ranged from 1 to 10 渭 g / ml. In SKOV3 subcutaneous tumor-bearing nude mice model, OT3AbDT (13.8 渭 g / time, once every 4 days, 4 times) was injected intratumoral, the tumor of tumor-bearing mice decreased significantly after 16 days, which was significantly different from that of PBS. In more subcutaneous tumor models, including human cervical cancer cell line Hela, liver cancer HepG2 and rectal cancer HR8348, OT3AbDT (13.8 渭 g / time) injected via caudal vein also showed the effect of inhibition of tumor volume growth in varying degrees. These results suggest that CDR3 未 transplantation antibody provides a new strategy and tool for tumor targeted immunotherapy. At the same time, the conformation of CDR3 未 peptide was studied by circular dichroism chromatography and molecular dynamics simulation, which provided necessary structural information for the study of CDR3 未 peptide.
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

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本文編號：2069257