本文選題：人γ干擾素 + 密碼子　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2005年碩士論文

【摘要】：γ干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)又稱免疫干擾素(Immune interferon),是由淋巴細胞分泌的一類功能調(diào)節(jié)蛋白。除具有抗病毒、抗腫瘤的作用外,它還是人體內(nèi)一種雙向免疫調(diào)節(jié)因子,在治療自身免疫性疾病方面有廣闊的應(yīng)用前景。天然人γ干擾素(hlFN-γ)來源有限、產(chǎn)量甚微,不能滿足科研和臨床應(yīng)用的需要。因此,利用基因工程方法獲得高表達的重組人γ干擾素(rhlFN-γ)成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點。 本文依據(jù)遺傳密碼具有簡并性的特點,在不改變氨基酸順序的條件下,用大腸桿菌基因序列中使用頻率高的強密碼子取代hlFN-γ基因編碼序列中的弱密碼子,并將修改后的編碼序列分為六段,進行人工化學(xué)合成。利用PCR技術(shù)擴增出目的基因后,將其克隆到表達載體pBV220上,進而轉(zhuǎn)化入E.coli JM109中進行誘導(dǎo)表達。經(jīng)SDS-PAGE和Western Blotting檢測證實,表達產(chǎn)物的分子量約為18KD,與預(yù)期相符。通過優(yōu)化表達條件,可提高目的蛋白表達產(chǎn)量,使其占菌體總蛋白的39.9%。重組蛋白rhlFN-γ主要存在于E.coli JM109的包涵體中,純化時將其自包涵體中溶出后,采用分步稀釋的方法進行復(fù)性。梯度透析后獲得的rhlFN-γ樣品委托中國藥品生物制品檢定所對其抗病毒活性進行測定,其活性效價為5.6×10~3IU/ml,比活性為2.8×10~4IU/mg。
[Abstract]:Interferon 緯 Interferon- 緯 (IFN- 緯), also known as immune interferon, is a kind of functional regulatory protein secreted by lymphocytes. In addition to its antiviral and anti-tumor effects, it is also a bidirectional immunomodulatory factor in human body, and has a broad application prospect in the treatment of autoimmune diseases. The source of natural human interferon 緯 hlFN- 緯 is limited and the yield is very small, which can not meet the needs of scientific research and clinical application. Therefore, the high expression recombinant human interferon 緯 (rhlFN- 緯) obtained by genetic engineering has become a hot research topic at home and abroad. Based on the degeneracy of genetic code and without changing the sequence of amino acids, the weak codon of hlFN- 緯 gene was replaced by a strong codon with high frequency in Escherichia coli gene sequence. The modified coding sequence was divided into six segments for artificial chemical synthesis. The target gene was amplified by PCR and cloned into the expression vector pBV220, which was transformed into E. coli JM109 for induction expression. SDS-PAGE and Western blotting showed that the molecular weight of the expressed product was about 18kD, which was in accordance with the expectation. By optimizing the expression conditions, the expression yield of the target protein can be increased, which accounts for 39.9% of the total bacterial protein. The recombinant protein rhlFN- 緯 was mainly found in the inclusion body of E. coli JM109. After being purified from the inclusion body, the recombinant protein was renatured by a step dilution method. The rhlFN- 緯 sample obtained after gradient dialysis was entrusted to the Chinese Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological products for the determination of its antiviral activity. The titer of its antiviral activity was 5.6 脳 10 ~ (-3) U / ml, and its specific activity was 2.8 脳 10 ~ (4) IUU / mg.
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R346

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本文編號：2021339