本文選題：谷胱甘肽(GSH) + 馬來(lái)酸二乙酯(DEM)��； 參考：《四川大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】：目的：通過(guò)巰基螯合劑DEM對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)活性的影響，探討氧化應(yīng)激導(dǎo)致NO通路功能障礙的可能機(jī)制及其在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病中的作用。方法：在培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞中加入不同劑量DEM、作用不同時(shí)間，以確定能明顯降低細(xì)胞內(nèi)GSH含量但卻不明顯影響細(xì)胞存活率的最適DEM作用濃度和作用時(shí)間。以該劑量DEM預(yù)處理內(nèi)皮細(xì)胞30分鐘后去除DEM，換成無(wú)血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)0、0.5、2、6、12、24小時(shí)后，檢測(cè)各時(shí)間段的細(xì)胞內(nèi)GSH含量、DDAH活性及上清液中NO含量。實(shí)驗(yàn)按照6個(gè)不同的檢測(cè)點(diǎn)分成6大組，分別為0、0.5、2、6、12、24小時(shí)組。分別設(shè)對(duì)照組與加藥組。細(xì)胞存活率檢測(cè)用MTT法；細(xì)胞內(nèi)GSH含量用熒光測(cè)定法；細(xì)胞內(nèi)DDAH活性用分光光度法檢測(cè)與ADMA反應(yīng)后生成的L-瓜氨酸的生成量來(lái)表示；上清液中NO含量用NO試劑盒檢測(cè)。結(jié)果：MTT結(jié)果顯示DEM最佳的作用濃度為0.6μmol／L，作用時(shí)間為30分鐘，該濃度DEM處理內(nèi)皮細(xì)胞30分鐘后，GSH含量已明顯降低，但內(nèi)皮細(xì)胞生存率僅比對(duì)照組輕微下降，未明顯影響細(xì)胞存活率；GSH濃度的檢測(cè)顯示，經(jīng)DEM預(yù)處理后半小時(shí)細(xì)胞內(nèi)GSH含量已較對(duì)照組明顯降低(降低28.7％，p＜0.05)，隨后逐步回升，12小時(shí)反超正常水平，隨后回落，至24小時(shí)時(shí)恢復(fù)至正常水平；DDAH活性的檢測(cè)顯示，經(jīng)DEM預(yù)處理后DDAH活性隨之降低，至2小時(shí)時(shí)達(dá)最低值(降低80.07％，，p＜0.01)，以后DDAH活性逐漸恢復(fù)，24小時(shí)后亦出現(xiàn)反超，呈類(lèi)似于GSH
[Abstract]:Aim: to investigate the possible mechanism of oxidative stress induced no pathway dysfunction and its role in the pathogenesis of atherosclerosis through the effect of mercapto chelating agent Dem on the activity of dimethyl arginine dimethylamine hydrolase (DDAH) in endothelial cells. Methods: different doses of DEM were added to cultured endothelial cells for different time to determine the optimal concentration and duration of Dem which could significantly reduce the content of GSH in the cells but did not affect the survival rate of the cells. After the endothelial cells were pretreated with Dem for 30 minutes, DEM was replaced by serum-free culture medium for 24 hours. After 24 hours, GSH content and DDAH activity and no content in supernatant were measured. According to six different detection points, the experiment was divided into 6 groups. They were divided into two groups: control group and drug addition group. The cell viability was detected by MTT assay, the intracellular GSH content was measured by fluorescence assay, the activity of DDAH was measured by spectrophotometry, and the production of L-citrulline was measured by spectrophotometry, and the no content in supernatant was detected by no kit. Results the optimal concentration of Dem was 0.6 渭 mol / L and the time of exposure was 30 minutes. The GSH content of endothelial cells was significantly decreased after 30 minutes of Dem treatment, but the survival rate of endothelial cells was only slightly decreased compared with the control group. The concentration of GSH did not affect the survival rate of the cells. The results showed that the GSH content in the cells treated with Dem was significantly lower than that in the control group at half hour after Dem preconditioning (lower than 28.7p < 0.05), then gradually increased to the normal level for 12 hours, then fell back to normal level. The detection of DDAH activity returned to normal level at 24 hours showed that after Dem pretreatment, the activity of DDAH decreased and reached the lowest value at 2 hours (80.07% lower than 0. 01%). After 24 hours, the activity of DDAH also appeared reverse ultrasound, which was similar to that of GSH.
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2018244