發(fā)布時(shí)間：2018-06-12 15:15

  本文選題：肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子 + 基因表達(dá)��； 參考：《中華傳染病雜志》2005年03期

【摘要】：目的通過(guò)構(gòu)建原核表達(dá)系統(tǒng),在大腸埃希菌中表達(dá)重組人肝再生增強(qiáng)因子(hALR)蛋白,為各種急慢性肝損傷及肝衰竭的治療提供新的治療方法奠定基礎(chǔ)。方法利用正常人肝組織提取總RNA,經(jīng)一步法逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)獲取hALRcDNA全序列,構(gòu)建原核表達(dá)載體hALRpET28a(+)轉(zhuǎn)化大腸埃希菌(BL21),誘導(dǎo)表達(dá)重組hALR蛋白,以組氨酸為標(biāo)簽進(jìn)行蛋白純化。十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)和WesternBlot鑒定重組蛋白。結(jié)果經(jīng)雙酶切和DNA測(cè)序證實(shí)hALRcDNA正確插入表達(dá)載體pET28a(+),成功表達(dá)并純化得相對(duì)分子質(zhì)量為23000的重組蛋白,低溫誘導(dǎo)表達(dá)使
[Abstract]:Objective to construct a prokaryotic expression system and express recombinant human liver regeneration enhancer hALR protein in Escherichia coli to provide a basis for the treatment of acute and chronic liver injury and liver failure. Methods Total RNAs were extracted from normal human liver tissue and hALR cDNA sequence was obtained by one step reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). The prokaryotic expression vector hALRpET28a () was transformed into Escherichia coli BL21, and the recombinant hALR protein was induced and expressed. The hALR protein was purified using histidine as label. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE) and Western blot were used to identify the recombinant protein. Results by double enzyme digestion and DNA sequencing, hALR cDNA was correctly inserted into the expression vector pET28a( +). The recombinant protein with relative molecular weight of 23000 was successfully expressed and purified.
【作者單位】： 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院
【基金】：國(guó)家863計(jì)劃(2003AA205150) 國(guó)家自然科學(xué)基金(30170255) 浙江省“新世紀(jì)151人才工程”基金 浙江省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科研人才基金(2001.QN01,2004B064) 浙江省中醫(yī)管理局青年人才基金(No:2002C037) 浙江省自然科學(xué)基金(Y204156)
【分類(lèi)號(hào)】：TQ464

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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【共引文獻(xiàn)】

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8 杜U，

本文編號(hào)：2010112