本文選題：細(xì)胞 + 抗原��； 參考：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2005年博士論文

【摘要】：本論文分兩部分：第一部分為γδT細(xì)胞抗原識(shí)別機(jī)制的研究。γδT細(xì)胞認(rèn)為是天然免疫和獲得性免疫之間的橋梁，廣泛地參與到抗感染免疫、腫瘤免疫和自身免疫等各個(gè)方面。但迄今為止，只有少數(shù)的γδT細(xì)胞受體(T cell receptor，TCR)所識(shí)別的配體被鑒定，γδTCR抗原識(shí)別的具體細(xì)節(jié)尚不清楚。對(duì)三種抗原受體的結(jié)構(gòu)和序列多樣性的研究結(jié)果提示，αβTCR、γδTCR和抗體的識(shí)別抗原特異性主要決定于其互補(bǔ)決定區(qū)(complementarity determining regions，，CDRs)；γδTCR在抗原識(shí)別上與αβTCR相差甚多而與抗體更類(lèi)似，被認(rèn)為是以“抗體類(lèi)似”的方式與抗原結(jié)合。γδTCR和抗體整體結(jié)構(gòu)比較以及δ鏈和抗體重鏈的CDR3長(zhǎng)度和氨基酸多樣性的比較提示，γδTCR的δ鏈和抗體重鏈在識(shí)別抗原中的作用類(lèi)似；CDR3δ是γδTCR與抗原結(jié)合的重要部位。 本課題組的前期工作證明，來(lái)源于卵巢癌的γδ腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(tumor infiltrating lymphocytes，TIL)δ鏈CDR3短肽OT3能特異性地結(jié)合腫瘤組織、腫瘤細(xì)胞系及其蛋白提取物和應(yīng)激分子。 為了進(jìn)一步闡明γδTCR抗原識(shí)別的機(jī)制，本研究利用PCR搭橋技術(shù)，將抗體重鏈CDR3區(qū)用被OT3短肽的相應(yīng)基因序列來(lái)替換，構(gòu)建成嵌合抗體重鏈的重組基因片段，克隆到表達(dá)載體pNγ1中，轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)；篩選并大量培養(yǎng)陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞以獲得含γδTCR CDR3δ的嵌合抗體。利用流式細(xì)胞、激光共聚焦顯微鏡和表面等離子體共振(surface plasmon resonance，SPR)等技術(shù)對(duì)嵌合抗體的抗原結(jié)合特異性進(jìn)行了研究，比較嵌合抗體與合成的OT3短肽在抗原識(shí)別特異性方面的差別，以闡明γδTCR抗原識(shí)別的機(jī)制及其結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。結(jié)果表明，含γδTCR CDR3δ的嵌合抗體可以與人卵巢癌細(xì)胞系SKOV3、HO8910和Hela等細(xì)胞及其蛋白提取物結(jié)合，與其他人類(lèi)腫瘤細(xì)胞系及其蛋白提取物不結(jié)合或結(jié)合較弱，提示嵌合抗體的抗原結(jié)合性
[Abstract]:This thesis is divided into two parts: the first part is the study of the mechanism of 緯 未 T cell antigen recognition. 緯 未 T cells are considered as a bridge between innate immunity and acquired immunity, which are widely involved in anti-infective immunity, tumor immunity and autoimmunity. However, so far, only a few ligands recognized by 緯 未 T cell receptor T cell receptor have been identified, and the specific details of 緯 未 TCR antigen recognition are not clear. The results showed that the specificity of 偽 尾 TCR, 緯 未 TCR and antibodies was mainly determined by their complementary determining regions, and 緯 未 TCR was more similar to 偽 尾 TCR than 偽 尾 TCR in antigen recognition. It is considered that it binds to antigen in an "antibody similar" manner. The comparison of the structure of 緯 未 TCR and antibody, and the comparison of CDR3 length and amino acid diversity of 未 chain and antibody heavy chain suggest that the 未 chain and antibody heavy chain of 緯 未 TCR are recognized in antigen. Similar to CDR3 未, CDR3 未 is an important site of binding of 緯 未 TCR to antigen. Our previous work demonstrated that the 未 chain CDR3 short peptide OT3 of 緯 未 tumor infiltrating lymphocytes derived from ovarian cancer can specifically bind tumor tissues, tumor cell lines and their protein extracts and stress molecules. In order to further elucidate the mechanism of 緯 未 TCR antigen recognition, the heavy chain CDR3 region of antibody was replaced by the corresponding gene sequence of OT3 short peptide, and cloned into the expression vector pN 緯 1. After transfection into eukaryotic cells, the chimeric antibody containing 緯 未 TCR CDR3 未 was obtained by screening and culturing the positive cells. The antigen-binding specificity of chimeric antibodies was studied by flow cytometry, laser confocal microscopy and surface plasmon resonance spectroscopy (SPR), and the differences between chimeric antibodies and synthetic OT3 short peptides in antigen recognition were compared. To elucidate the mechanism of 緯 未 TCR antigen recognition and its structural basis. The results showed that the chimeric antibody containing 緯 未 TCR CDR3 未 could bind to human ovarian cancer cell lines SKOV3HO8910 and Hela and its protein extracts, but not to other human tumor cell lines and their protein extracts, indicating the antigenicity of chimeric antibodies.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1958482