本文選題：神經(jīng)干細胞 + 基因轉(zhuǎn)染�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學》2006年博士論文

【摘要】： 阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一種中老年人常見的中樞神經(jīng)退行性疾病,主要表現(xiàn)為進行性癡呆、記憶和認知功能減退,其患病率隨年齡增長而上升。隨著世界人口日趨老齡化,AD已經(jīng)成為繼心血管疾病、腫瘤和腦卒中之后的第4位死亡原因,當前AD已成為老年醫(yī)學的重要研究課題。在神經(jīng)退行性疾病中,神經(jīng)元的變性、壞死是其功能障礙的主要原因,因此采取有效措施來補充和取代已死亡的神經(jīng)元,并恢復其功能,將是治療神經(jīng)退行性疾病的重要途徑。已有研究表明,神經(jīng)干細胞(Neural stem cells,NSCs)具有自我更新能力,能夠分化成神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞。利用NSCs植入受損的神經(jīng)組織,替代和修復受損的神經(jīng)元,以恢復大腦的正常功能,是未來治療AD的一個重要方向。目前,利用NSCs治療AD的研究尚處于初步階段。 已經(jīng)證實NSCs不僅存在于發(fā)育中的神經(jīng)系統(tǒng),也持續(xù)存在于成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)多個腦區(qū)。近年來對于NSCs在神經(jīng)系統(tǒng)疾病應用方面作了大量的研究,然而真正有效的策略是直接移植或作為基因治療的載體細胞。但移植的NSCs成活率低,分化為神經(jīng)元的比例非常低,因此治療作用非常有限。目前需要解決體外培養(yǎng)NSCs保持其強大的增殖能力和誘導其定向分化的問題。已有研究表明,noggin基因在體內(nèi)外均具有明顯的誘導作用,能夠促進NSCs的定向分化,為了提高移植NSCs的治療效果,我們用noggin基因轉(zhuǎn)染NSCs后移植入海馬內(nèi),利用NSCs自身的修復和noggin基因定向誘導的雙重作用,給予衰老小鼠的海馬補充有一定功能的神經(jīng)元,以達到更好的治療效果。 在本實驗中,我們通過基因重組技術(shù)構(gòu)建了表達noggin基因的重組腺病毒,通過病毒上清感染培養(yǎng)的NSCs,將表達noggin的NSCs移植入衰老模型小鼠的海馬內(nèi),觀察noggin修飾的NSCs是否對衰老小鼠具有一定的治療作用,并與僅含GFP的對照病毒pAdEasy-1-GFP感染的NSCs移植的療效進行比較,實驗結(jié)果如下: 1.成功構(gòu)建表達noggin基因的重組腺病毒載體pAdEasy-1-noggin和對照病毒載體pAdEasy-1-GFP,并鑒定其在靶細胞中表達; 2.分離、培養(yǎng)并鑒定新生昆明小鼠NSCs;
[Abstract]:Alzheimer disease (AD) is a common degenerative disease of central nervous system in middle and old people. The main manifestations of AD are progressive dementia, memory and cognitive impairment, and the prevalence rate increases with age. With the aging of the world population, AD has become the fourth leading cause of death after cardiovascular disease, tumor and stroke. At present, AD has become an important research topic in geriatrics. In neurodegenerative diseases, degeneration and necrosis of neurons are the main causes of dysfunction. Therefore, it is an important way to treat neurodegenerative diseases to take effective measures to supplement and replace the dead neurons and to restore their functions. It has been shown that neural stem cells have the ability of self-renewal and can differentiate into neurons and glial cells. The use of NSCs to implant damaged nerve tissue to replace and repair damaged neurons in order to restore normal brain function is an important direction in the treatment of AD in the future. At present, the treatment of AD with NSCs is still in the preliminary stage. It has been proved that NSCs exists not only in the developing nervous system, but also in multiple brain regions of the adult central nervous system. In recent years, a lot of research has been done on the application of NSCs in nervous system diseases. However, the effective strategy is to transplant directly or as vector cells for gene therapy. However, the survival rate of transplanted NSCs is low and the proportion of differentiated neurons is very low, so the therapeutic effect is very limited. At present, it is necessary to solve the problem that NSCs can maintain its strong proliferative ability and induce its directional differentiation in vitro. Previous studies have shown that the gene can induce the directional differentiation of NSCs in vitro and in vivo. In order to improve the therapeutic effect of NSCs transplantation, noggin gene was transfected into NSCs and implanted into hippocampus. By using the dual effects of NSCs repair and directed induction of noggin gene, the hippocampal neurons of aging mice were supplemented with some functional neurons, so as to achieve a better therapeutic effect. In this experiment, we constructed recombinant adenovirus expressing noggin gene by gene recombination technique. NSCs expressing noggin was transplanted into hippocampus of aging model mice by infection of NSCs with virus supernatant. To observe whether noggin modified NSCs has a certain therapeutic effect on aging mice, and to compare the effect of NSCs transplantation with GFP only virus pAdEasy-1-GFP infection. The results are as follows: 1. The recombinant adenovirus vector pAdEasy-1-noggin expressing noggin gene and the control vector pAdEasy-1-GFPwere successfully constructed and expressed in target cells. 2. The NSCs of newborn Kunming mice were isolated, cultured and identified.
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R-332

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本文編號：1937405