本文選題：NYD-SP6 + 精子發(fā)生��； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2006年博士論文

【摘要】：正常的精子發(fā)生依賴于生精細(xì)胞的分裂分化和生精細(xì)胞凋亡之間的平衡，其背后是錯(cuò)綜復(fù)雜的基因-蛋白調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。尋找并掌握這些基因／蛋白的功能，將能更深入地闡明精子發(fā)生的分子調(diào)控機(jī)理。 NYD-SP6是本實(shí)驗(yàn)室克隆出的一條編碼PHD蛋白的新基因，前期在mRNA水平對(duì)其進(jìn)行的一些初步研究已經(jīng)高度提示它是一條新的人精子發(fā)生相關(guān)基因。本研究中，，我們對(duì)NYD-SP6基因在精子發(fā)生過(guò)程中的明確作用及其機(jī)制進(jìn)行了探討。 首先我們?cè)诘鞍姿綑z測(cè)了NYD-SP6在人睪丸組織中的細(xì)胞定位。構(gòu)建了pET-22b-NYD-SP6(全長(zhǎng)ORF)原核表達(dá)質(zhì)粒，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)得到49KD原核表達(dá)蛋白。用純化的蛋白免疫BalB／C小鼠后獲得NYD-SP6多克隆抗體。進(jìn)一步進(jìn)行人睪丸組織免疫組化分析，顯示NYD-SP6蛋白在包括精原細(xì)胞、精母細(xì)胞和精子細(xì)胞的各級(jí)生精細(xì)胞核中表達(dá)，提示NYD-SP6可能直接調(diào)控生精細(xì)胞的某種(些)生物學(xué)過(guò)程，影響精子發(fā)生。 進(jìn)一步我們以生精細(xì)胞為研究平臺(tái)，檢測(cè)NYD-SP6在精子發(fā)生過(guò)程中的作用。由于NYD-SP6在小鼠中有高度同源的基因，因此我們?cè)谛∈缶?xì)胞系中超表達(dá)NYD-SP6，進(jìn)行了以下功能研究： ① 應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了超表達(dá)組細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞的細(xì)胞周期，結(jié)果顯示兩組在G_0／G_1期、S期及_G2／M期的細(xì)胞比例均無(wú)顯著差異。提示NYD-SP6對(duì)生精細(xì)胞的分裂增殖無(wú)影響。 ② 應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、DNA ladder電泳、彗星實(shí)驗(yàn)三種方法檢測(cè)了超表達(dá)組細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞分別在自發(fā)情況和化學(xué)藥物Taxol誘導(dǎo)
[Abstract]:Normal spermatogenesis depends on the balance between the division and differentiation of spermatogenic cells and the apoptosis of spermatogenic cells. Finding and mastering the function of these genes / proteins will further clarify the molecular regulation mechanism of spermatogenesis. NYD-SP6 is a novel gene encoding PHD protein cloned in our laboratory. Some preliminary studies on it at the mRNA level have highly indicated that it is a new human spermatogenesis related gene. In this study, we investigated the role and mechanism of NYD-SP6 gene in spermatogenesis. We first examined the cellular localization of NYD-SP6 in human testis at the protein level. The prokaryotic expression plasmid pET-22b-NYD-SP6 (full-length ORF) was constructed and 49KD prokaryotic expression protein was obtained by IPTG induction. NYD-SP6 polyclonal antibody was obtained by immunizing BalB/C mice with purified protein. Further immunohistochemical analysis of human testis showed that NYD-SP6 protein was expressed in spermatogenic nuclei, including spermatogonium, spermatocytes and sperm cells, suggesting that NYD-SP6 may directly regulate some biological process of spermatogenic cells. Affect spermatogenesis. Further, we used spermatogenic cells as a platform to detect the role of NYD-SP6 in spermatogenesis. Since NYD-SP6 has highly homologous genes in mice, we overexpression NYD-SP6 in mouse spermatogonium cell lines. 1 flow cytometry was used to detect the cell cycle between the overexpression group and the control group. The results showed that there was no significant difference between the two groups in the proportion of cells in S phase and G 2 / M phase in G_0/G_1 phase. The results suggest that NYD-SP6 has no effect on the division and proliferation of spermatogenic cells. (2) flow cytometry and comet assay were used to detect the spontaneous and chemical Taxol induction of the cells in the hyper-expression group and the control group, respectively.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R321

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1888914