本文選題：CpG + ODN��； 參考：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： 目的： 選擇兩種新型的生物型免疫刺激劑CpG ODN和poly(I：C)聯(lián)合作為多肽抗原佐劑，通過(guò)體外及體內(nèi)多種免疫功能指標(biāo)的檢測(cè)，探討二者聯(lián)合與多肽免疫的佐劑效果。 方法： 在體外，用CpG 2395和poly(I：C)單獨(dú)或聯(lián)合刺激脾細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞因子分泌情況以及細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)；在體內(nèi)，CpG 2395和poly(I：C)單獨(dú)或者聯(lián)合作為MUC1多肽抗原的佐劑免疫小鼠，通過(guò)細(xì)胞免疫水平和體液免疫水平兩個(gè)方面的檢測(cè)評(píng)價(jià)各組間免疫水平的差別。主要包括ELISA方法檢測(cè)免疫血清中的抗體滴度、CTL殺傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)殺傷性T細(xì)胞的細(xì)胞毒作用、流式細(xì)胞技術(shù)分析免疫前后各細(xì)胞亞群的變化，等等；在腫瘤預(yù)防實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)抑瘤率以及肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)等指標(biāo)評(píng)價(jià)二者作為佐劑對(duì)MUC1免疫小鼠腫瘤預(yù)防效果的影響。 結(jié)果： 體外用CpG 2395、poly(I：C)、以及二者聯(lián)合與正常小鼠的脾細(xì)胞混合培養(yǎng)24h后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，檢測(cè)到CpG 2395與poly(I：C)聯(lián)合與單獨(dú)應(yīng)用相比能更好地誘導(dǎo)IL-12、TNF-α以及IFN-γ的產(chǎn)生。CpG 2395與poly(I：C)聯(lián)合作為MUC1多肽的佐劑免疫C57BL／6小鼠后，檢測(cè)血清中抗MUC1多肽的抗體，并未見(jiàn)到聯(lián)合組效價(jià)比單用組高。對(duì)免疫后小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分型，，聯(lián)合組小鼠CD4+T細(xì)胞及CD8+細(xì)胞數(shù)量均較單用組升高。CpG 2395、poly(I：C)聯(lián)合作為佐劑與MUC1聯(lián)合免疫C57BL／6小鼠后接種Lewis肺癌后，對(duì)肺癌的預(yù)防效果優(yōu)于CpG 2395或poly(I：C)單獨(dú)作為佐劑的平行組。而且肺轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量也明顯較少。 結(jié)論： 合成的MUC1蛋白兩個(gè)重復(fù)序列的多肽，可以作為腫瘤疫苗，表現(xiàn)出有效的腫瘤預(yù)防作用。CpG 2395、poly(I：C)聯(lián)合作為可溶性多肽疫苗的免疫佐劑，與單用相比能更有效地增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答。
[Abstract]:Objective: Two novel biological immunostimulants CpG ODN and polypeptide I: C) were selected as polypeptide antigen adjuvants. The adjuvant effect of the combination of them and polypeptide immunity was studied by detecting various immune function indexes in vitro and in vivo. Methods: In vitro, spleen cells were stimulated with CpG 2395 and polychylinic I: C alone or in combination to detect cytokine secretion and cell proliferation. In vivo, CpG 2395 and polychlor I: C) were used to immunize mice as adjuvants of MUC1 polypeptide antigen alone or in combination. Cellular immunity and humoral immunity were measured to evaluate the difference of immune level among groups. It mainly includes the detection of antibody titer in immune serum by ELISA assay, the cytotoxicity of killer T cells, the changes of subsets of T cells before and after immunization by flow cytometry, and so on. The effect of the two adjuvants on tumor prevention of MUC1 immunized mice was evaluated by tumor inhibition rate and the number of metastatic nodules. Results: In vitro, the supernatants were collected by CpG 2395 polyI: Con and combined culture with spleen cells of normal mice for 24 hours. It was found that the combination of CpG 2395 and polychlor I: C) could induce the production of IL-12 TNF- 偽 and IFN- 緯 as adjuvant of MUC1 polypeptide. After immunizing C57BL/6 mice with MUC1 polypeptide, the antibody against MUC1 polypeptide in serum was detected. It was not seen that the titer of the combined group was higher than that of the single use group. The spleen cells of immunized mice were classified by flow cytometry. The numbers of CD4 T cells and CD8 cells in the combined group were higher than those in the control group. CpG 2395 CD4 / C) combined as adjuvant and MUC1 combined immunized C57BL/6 mice were inoculated with Lewis lung cancer. The prophylactic effect on lung cancer was superior to that of CpG 2395 or poly (I: C) alone as an adjuvant parallel group. And the number of lung metastases is also significantly less. Conclusion: The synthesized polypeptides with two repeat sequences of MUC1 protein can be used as tumor vaccine, showing effective tumor prophylaxis. CpG 2395 polypeptide I: C) can be used as immune adjuvant of soluble polypeptide vaccine. Compared with the single use, it can enhance the body's anti-tumor immune response more effectively.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R392;R730.5

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本文編號(hào)：1819668