本文選題：動(dòng)脈粥樣硬化 + 泡沫細(xì)胞��； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文

【摘要】：A類清道夫受體(scavenger receptor-A，SR-A)是一種主要位于巨噬細(xì)胞表面的三聚體跨膜糖蛋白，能夠識(shí)別多種配基，在宿主免疫調(diào)節(jié)、清除凋亡細(xì)胞以及動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中都發(fā)揮重要作用。研究表明，SR-A的胞漿域能夠調(diào)節(jié)受體介導(dǎo)的脂質(zhì)內(nèi)吞、細(xì)胞黏附以及受體在細(xì)胞表面表達(dá)等過(guò)程。去除SR-A胞漿域的受體雖然可以在細(xì)胞中表達(dá)并能結(jié)合乙�；兔芏戎鞍�(AcLDL)，但不能介導(dǎo)AcLDL進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞。因此，，推測(cè)SR-A的胞漿域可能是干預(yù)泡沫細(xì)胞形成的重要靶點(diǎn)。本研究擬篩選與胞漿域相互作用的小分子多肽，研究這種多肽對(duì)SR-A功能的影響，以期研制出能夠干預(yù)泡沫細(xì)胞形成的多肽。 在本研究中，首先將SR-A胞漿域編碼序列克隆到融合表達(dá)載體PGEX-2T中，陽(yáng)性克隆經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，表達(dá)出氨基端融合谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)的SR-A胞漿域蛋白。利用親和層析法在非變性條件下對(duì)表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行純化。經(jīng)SDS-PAGE電泳及Western blot驗(yàn)證，GST與SR-A胞漿域融合蛋白為可溶性表達(dá)，經(jīng)純化后目的蛋白純度大于95％。用純化的目的蛋白包被谷胱甘肽瓊脂糖珠，淘篩噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)，經(jīng)過(guò)四輪“吸附-洗脫-擴(kuò)增”親和篩選，隨機(jī)挑選50個(gè)噬菌體克隆，經(jīng)噬菌體ELISA法檢測(cè)到8個(gè)噬菌體克隆能特異性結(jié)合SR-A的胞漿域，而與GST無(wú)交叉反應(yīng)。抽提陽(yáng)性克隆DNA并進(jìn)行序列測(cè)定，得到三種多肽序列并命名為：H5、H9、H11。將此
[Abstract]:Class A scavenger receptor scavenger receptor-SR-A-) is a trimer transmembrane glycoprotein mainly located on the surface of macrophages, capable of recognizing multiple ligands in host immune regulation. The removal of apoptotic cells and the development of ASA play an important role. It has been shown that the cytoplasmic domain of SR-A can regulate receptor-mediated lipid endocytosis, cell adhesion and receptor expression on cell surface. The receptors that remove the cytoplasmic domain of SR-A can express in cells and bind to acetylated low density lipoprotein (LDL), but can not mediate AcLDL into the cells, and the cells can not be transformed into foam cells. Therefore, we speculate that the cytoplasmic domain of SR-A may be an important target for the intervention of foam cell formation. The aim of this study was to screen small polypeptides interacting with cytoplasmic domain and to study the effects of the peptides on the function of SR-A in order to develop a polypeptide that could interfere with the formation of foam cells. In this study, the coding sequence of SR-A cytosolic domain was first cloned into the fusion expression vector PGEX-2T, and the positive clone was induced by IPTG to express the SR-A cytosolic domain protein fused with glutathione S-transferase (GST). The expressed target protein was purified by affinity chromatography under non-denaturation conditions. SDS-PAGE electrophoresis and Western blot showed that the fusion protein was soluble expressed in the cytoplasmic domain of SR-A, and the purity of the target protein was higher than 95 after purification. Glutathione agarose beads were coated with purified protein and phage phage random peptide library was screened. After four rounds of affinity screening, 50 phage clones were randomly selected. Eight phage clones were identified by phage ELISA to specifically bind to the cytoplasmic domain of SR-A without cross-reaction with GST. The positive clone DNA was extracted and sequenced. Three kinds of polypeptide sequences were obtained and named as: H5, H9, H11. To change this
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1817100