一種新的Th2高表達蛋白—嗜中性顆粒蛋白(NGP)的表達、純化及其性質與功能初探
本文選題:Th細胞 + 嗜中性顆粒蛋白; 參考:《華東師范大學》2006年碩士論文
【摘要】:CD4~+T細胞根據其所分泌的細胞因子的不同,可以分成兩個亞類:Th1細胞和Th2細胞。Th1細胞主要分泌INF-γ、IL-2、TNF-α和TNF-β,對于細胞內病原體例如單核細胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)和利什曼原蟲(Leishmania major)的清除十分重要;而Th2細胞主要分泌IL-4、IL-13、IL-5、IL-6、IL-10和IL-9,從而誘導體液反應去清除腸內蠕蟲和線蟲等寄生蟲。體內Th1和Th2的平衡在維護機體免疫狀態(tài)平衡、調節(jié)生理機能、防御感染、監(jiān)視腫瘤等多方面具有重要的意義。若朝向Th1分化的細胞過量,將導致自身免疫性疾病的發(fā)生;反之,若Th2過于活躍,則會導致過敏和哮喘的發(fā)生。 盡管近幾年人們對輔助性T細胞分化的認識有了很大的提高,但仍然存在一些問題。我們實驗室應用高通量基因芯片技術對Th1和Th2的基因表達譜進行了研究,結果發(fā)現了一種新的Th2高表達基因——嗜中性顆粒蛋白(NGP)基因;并且通過RT—PCR、實時定量PCR進一步確認NGP的確在Th2細胞中的高表達。由此推斷NGP可能在輔助性T細胞的分化中發(fā)揮某種功能。將NGP克隆入質粒pEGFP-N1后,利用激光共聚焦熒光顯微鏡技術,發(fā)現融合表達的NGP—GFP定位于細胞質中,并且轉染了NGP-pEGFP-N1的293T細胞的上清液可以抑制OVA誘導的小鼠脾細胞的增殖。為了進一步對NGP進行功能研究,表達純化了NGP-GST融合蛋白,同時制備了抗體。經過westernblot驗證,,在蛋白水平上也證實NGP是在Th2中高表達。由此,可以初步斷定NGP為Th2分泌的一種新的細胞因子。進一步對純化的NGP-GST蛋白進行功能研究表明,所純化的融合蛋白同樣可以抑制OVA誘導的小鼠脾細胞增殖。 綜上所述,本研究可能發(fā)現了Th2分泌的一種新的細胞因子。這種細胞因子具有抑制特異性抗原所引起的脾細胞增殖的功能。
[Abstract]:Th1 cells secrete INF - 緯 , IL - 2 , TNF - 偽 and TNF - 尾 , which are very important for the removal of intracellular pathogens such as monocytes and Leishmania major .
Th2 cells mainly secrete IL - 4 , IL - 13 , IL - 5 , IL - 6 , IL - 10 and IL - 9 , thus inducing humoral response to remove parasites such as intestinal worms and nematodes . The balance of Th1 and Th2 in vivo has important significance in maintaining the balance of immune status , regulating physiological function , preventing infection , and monitoring tumor .
Conversely , if Th2 is too active , allergic reactions and asthma occur .
Although there has been a great improvement in the understanding of helper T cell differentiation in recent years , there are still some problems . Our laboratory uses high - throughput gene chip technology to study the gene expression profiles of Th1 and Th2 .
In order to further study the function of NGP , it was found that NGP - GFP could play a role in the differentiation of helper T cells .
In conclusion , the present study may find a novel cytokine secreted by Th2 , which has the function of inhibiting the proliferation of splenic cells caused by specific antigens .
【學位授予單位】:華東師范大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2006
【分類號】:R392;Q78
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