本文選題：大鼠腎小管上皮細(xì)胞　切入點(diǎn)：腎小管上皮轉(zhuǎn)分化　出處：《浙江醫(yī)學(xué)》2014年17期

【摘要】：目的觀察miRNA在大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E)發(fā)生上皮-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(EMT)過(guò)程中的變化,篩選與腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化相關(guān)的miRNA。方法體外培養(yǎng)NRK-52E,用5 ng/ml轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-13 1(TGF-13 1)分別作用0、3、6、12、24、48 h,以0 h為空白組(BC組),余為T(mén)GF-β1組。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;real-time PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)、E鈣蛋白(E-cad)、1型膠原(Col 1)和纖連蛋白(FN)的mRNA表達(dá)水平;Western blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)α-SMA的表達(dá)水平;ELISA法檢測(cè)上清液中FN的含量;莖環(huán)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)6條miRNA在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平。結(jié)果與BC組比較,TGF-β1組部分細(xì)胞失去原有的鵝卵石形態(tài),轉(zhuǎn)變成成纖維細(xì)胞特有的梭形;細(xì)胞內(nèi)α-SMA、Col I和FN的mRNA表達(dá)上調(diào),E-cad的mRNA表達(dá)下調(diào),細(xì)胞內(nèi)α-SMA表達(dá)量增多,細(xì)胞上清液中FN含量升高(均P0.05);miR-30d、miR-132和miR-21的表達(dá)上調(diào),miR-200b、miR-192和miR-10b的表達(dá)下調(diào)(均P0.05)。結(jié)論 TGF-β1可誘導(dǎo)NRK-52E發(fā)生EMT。miR-30d、miR-132、miR-21、miR-200b、miR-192和miR-10b可能參與大鼠腎小管上皮細(xì)胞EMT,值得進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Objective to observe the changes of miRNA in the process of epithelial-myofibroblast transdifferentiation in rat renal tubular epithelial cell line NRK-52. Methods NRK-52E was cultured in vitro and treated with 5 ng/ml transforming growth factor (TGF- 13 1(TGF-13 1) for 48 h, respectively. The cells were treated with 0 h as blank group and TGF- 尾 1 as control group. The morphology of cells was observed by inverted phase contrast microscope. The expression of 偽 -SMA in the supernatant was detected by real-time PCR assay. The expression of 偽 -SMA in the supernatant was detected by Elisa and the expression level of 偽 -SMA in the supernatant was detected by Elisa. The expression level of 偽 -SMA in the supernatant was determined by Elisa. The expression level of 偽 -SMA in the supernatant was determined by Elisa method and the expression level of 偽 -SMA in the supernatant was determined by Elisa. The expression level of 偽 -SMA in the supernatant was determined by Elisa. Results compared with BC group, some cells of TGF- 尾 1 group lost their cobblestone morphology and transformed into fusiform of fibroblast. The expression of 偽 -SMA-Col I and FN mRNA up-regulated the expression of E-cad mRNA and increased the expression of 偽 -SMA in cells. The content of FN in supernatant was increased (both P0.05 miR-30dnmiR-132 and miR-21 up-regulated the expression of miR-200bnmiR-192 and miR-10b (both P0.05A). Conclusion TGF- 尾 1 can induce NRK-52E to produce EMT.miR-132miR-132miR-2miR-200bmiR-192 and miR-10b may be involved in EMTs of rat renal tubular epithelial cells.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科;溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院心血管內(nèi)科;溫州醫(yī)科大學(xué)微生物免疫學(xué)教研室;
【基金】：溫州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(Y20080116) 浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(Y12H050017) 浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2010KYA135)
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1685917