本文選題：蛋白質(zhì)組　切入點：雙向電泳　出處：《中國藥品生物制品檢定所》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：隨著人類基因組研究計劃的完成，生命科學的研究開始進入后基因組時代。目前，蛋白質(zhì)組學的研究已經(jīng)成為21世紀生命科學研究的熱點領(lǐng)域之一。本文通過構(gòu)建以雙向電泳(2-DE)相關(guān)方法為基礎(chǔ)的血漿蛋白質(zhì)組研究體系，針對人血液成分及其衍生物包括血漿、血清、紅細胞和人血白蛋白等不同樣本，采用比較蛋白質(zhì)組學的基本技術(shù)路線，進行了蛋白質(zhì)組學的研究。 以正常人血漿樣本，建立和優(yōu)化了血漿蛋白質(zhì)的2-DE實驗方法與信息處理方法，包括：(1)通過對雙胺銀染法和酸性銀染法檢測靈敏度的比較，確定了以酸性銀染法作為觀察電泳結(jié)果的基本方法，其靈敏度可達2ng，且膠板背景低于雙胺銀染法；(2)通過對等電聚焦過程電泳參數(shù)的調(diào)整和優(yōu)化，提高了2-DE圖譜的清晰度和穩(wěn)定性；(3)通過比較Albumin and lgG removal Kit對血漿樣本2-DE圖譜的影響，發(fā)現(xiàn)該試劑盒雖然對于白蛋白和球蛋白等高豐度蛋白具有顯著的去除作用，但同時對低豐度蛋白也存在非特異去除作用；(4)通過不同pH范圍的IPG膠條對血漿蛋白2-DE分離效果的比較，確定以窄pH膠條(pH4-7)分離血漿蛋白組分的效果明顯優(yōu)于寬pH膠條(pH3-10)；(5)確定了以軟件自動找點功能與灰度分析相結(jié)合的差異蛋白斑點的基本比較方法。 以SDS-PAGE和2-DE方法，，分別對正常人血漿樣本、國產(chǎn)人血白蛋白樣品和國產(chǎn)重組人白蛋白樣品進行電泳分離，采用膠體考染和銀染顯示電泳結(jié)果，以Labworks4.5軟件分析圖譜，比較了人血白蛋白(人血漿蛋白衍生物)的純度差異。結(jié)果顯示：(1)人血白蛋白樣品的SDS-PAGE和2-DE電泳純度低于現(xiàn)行方法的結(jié)果；(2)重組人白蛋白樣品含有明顯的宿主細胞蛋白。提示，SDS-PAGE和2-DE可以提高血液制品純度分析的靈敏度。 以2-DE方法比較了不同中和抗體效價的SARS康復患者血漿樣本(試驗組)與正常人單采血漿樣本(對照組)蛋白譜的異同。結(jié)果顯示：(1)對照組樣本的2-DE圖譜出現(xiàn)蛋白斑點320±20個，試驗組樣本出現(xiàn)蛋白斑點332±37個，二者主要斑點的位置與數(shù)量基本一致；(2)對照組中少量蛋白斑點的出現(xiàn)頻度不同；(3)試驗組有6個蛋白點群與對照組出現(xiàn)差異，并在相同區(qū)域Ⅲ內(nèi)有3個蛋白斑點的灰度值出現(xiàn)變化，且灰度值變化與樣本的中和抗體效價值呈正相關(guān)性。以Capillary -LC／Q-TOF-ULTIMA進行差異蛋白斑點的質(zhì)譜分析的結(jié)果顯示：灰度值出現(xiàn)下調(diào)的蛋白斑點為補體C3片段(Spot8)和結(jié)合珠蛋白前體(Spot9)，二者均為急性反應蛋白。 以2-DE方法比較了EGFR外顯子19缺失突變的肺癌患者血清樣本(試驗組)與正常人血清樣本(對照組)蛋白譜的異同。結(jié)果顯示：(1)對照組樣本的2-DE圖譜
[Abstract]:With the accomplishment of human genome project, life science research began to enter the post genome era. At present, proteomics research has become a hot research field of life sciences in twenty-first Century. This paper constructs by two-dimensional electrophoresis (2-DE) method based on plasma proteome research system for human blood components and plasma derivatives, serum, erythrocyte and Human Albumin different samples, using the basic technical route of comparative proteomics, the proteomics research.
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本文編號：1644548