本文選題：EGS　切入點：抗病毒　出處：《暨南大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目的：本實驗擬在前期研究的基礎上，篩選和檢測已經(jīng)經(jīng)過體外實驗證明有活性的HCMV UL54基因特異的EGS(dEGS-T6和dEGS-T7)的胞內抗病毒活性。 方法：本課題分為三部分：首先用流式細胞儀檢測了FITC標記的EGS轉染細胞的效率；第二，，在感染病毒的培養(yǎng)細胞中，用相對定量PCR來檢測轉染的EGS對HCMV的U54基因表達的影響；第三，轉染EGS的細胞感染病毒后，通過檢測培養(yǎng)上清液中病毒量的變化，制作病毒生長曲線，以此評價EGS對HCMV復制的抑制作用。 結果：雖然在高濃度(100nM和80nM)時，EGG表現(xiàn)出對病毒基因表達的非特異性抑制，但是在轉染60nM的EGS時，dEGS-T7能明顯抑制細胞內病毒U54基因mRNA的表達量而dEGS-T6和無關dEGS-TK對U54基因mRNA的表達無明顯影響。因此，選擇60hM為最佳轉染濃度進一步檢測dEGS-T7對胞內HCMV復制的影響時發(fā)現(xiàn)，dEGS-T7可以使病毒感染細胞培養(yǎng)液中的病毒減少約67.27±0.10％～76.47±1.23％，而轉染無關EGS后與未轉染EGS的對照組培養(yǎng)液中的病毒數(shù)無明顯減少。 結論：通過本研究的篩選步驟，獲得一種具有胞內抗HCMV活性的EGG序列dEGS-T7，從而為新型抗HCMV反義藥物的進一步研究與開發(fā)奠定了基礎。
[Abstract]:Aim: to screen and detect the intracellular antiviral activities of HCMV UL54 gene specific EGS(dEGS-T6 and dEGS-T7, which have been proved to be active in vitro. Methods: this study was divided into three parts: firstly, the efficiency of FITC labeled EGS transfected cells was detected by flow cytometry; secondly, the effect of transfected EGS on the expression of U54 gene of HCMV was detected by relative quantitative PCR in infected virus culture cells. Thirdly, after the cells transfected with EGS were infected with virus, the virus growth curve was made by detecting the changes of virus content in the culture supernatant, so as to evaluate the inhibitory effect of EGS on the replication of HCMV. Results: although at high concentrations of 100nM and 80nM), EGG showed a nonspecific inhibition on viral gene expression. However, dEGS-T7 could significantly inhibit the expression of U54 gene mRNA in the cells transfected with 60nM EGS, but dEGS-T6 and unrelated dEGS-TK had no significant effect on the expression of U54 gene mRNA. The optimal transfection concentration of 60hM was chosen to further detect the effect of dEGS-T7 on the replication of intracellular HCMV. It was found that dEGS-T7 could reduce the virus content in the culture medium of virus-infected cells about 67.27 鹵0.10 and 76.47 鹵1.23. but after transfection of EGS and control medium without EGS transfection, the effect of DEGS-T7 on HCMV replication was observed. There was no significant decrease in the number of viruses. Conclusion: a EGG sequence dEGS-T7 with intracellular HCMV activity was obtained through the screening step of this study, which laid a foundation for the further research and development of novel antisense drugs against HCMV.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R373

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