本文選題：鼠疫耶爾森氏菌　切入點：蛋白芯片　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景 鼠疫是一種烈性傳染病,到目前為止人們對鼠疫的致病因素、流行機(jī)制還沒有完全了解。雖然現(xiàn)在已經(jīng)有多種鼠疫疫苗,但這些疫苗對肺型鼠疫的免疫保護(hù)作用并不理想�；贔1和V抗原基礎(chǔ)上,加入其它具有免疫保護(hù)作用成分的多亞單位疫苗將是未來鼠疫疫苗研究的一個方向。對感染患者與免疫動物體內(nèi)血清抗體譜的研究將為更好的了解鼠疫的致病機(jī)制,尋找新的亞單位疫苗成分提供線索。蛋白芯片技術(shù)是近年來發(fā)展起來的能夠同時研究多個抗原-抗體、蛋白-蛋白相互作用的高通量技術(shù),它具有大規(guī)模、高通量、所需樣品少等特點。 方法 挑選出202條鼠疫菌已知的或推測的與毒力相關(guān)蛋白的基因與表達(dá)載體pET32a連接在大腸肝菌BL21(DE3)中表達(dá),利用表達(dá)的目的蛋白氨基端帶有6×His標(biāo)簽與Ni-NTA具有親和的原理,通過96孔板對蛋白進(jìn)行高通量純化。純化的蛋白點在醛基化玻片上制備蛋白芯片。通過與鼠疫患者血清、EV76疫苗株免疫兔血清、鼠疫菌感染兔血清及自然疫源地黃鼠血清反應(yīng),檢測不同血清中抗體升高的種類及趨勢。 結(jié)果 通過與不同來源的鼠疫菌感染血清作用,共有15個蛋白在所有的血清中均檢測到相應(yīng)抗體,其中YPMT1.84,YPMT1.24c,YPMT1.48c,YPCD1.31c,YPCD1.28,YPCD1.32c,YPCD1.26c,YPCD1.06c,YPO1435,YPO1303,YPO2118,YPO3319,YPO2113,YPO2090,YPO2394抗體升高幅度大,持續(xù)時間長,這些蛋白可以作為下一階段鼠疫疫苗研究的重點,研究其保護(hù)性。除了在所有的血清抗體譜中均升高的蛋白外,在各不同血清的抗體譜中均存在特異性抗體升高的蛋白,這些蛋白可能與鼠疫菌在機(jī)體內(nèi)的致病性相關(guān)。分析不同感染狀態(tài)下的抗體譜,將為更深入的了解鼠疫菌的致病機(jī)制提供線索。
[Abstract]:Background Yersinia pestis is a severe infectious disease. So far, people have not fully understood the pathogenic factors and epidemic mechanism of plague. Although there are many kinds of Yersinia pestis vaccine, But the immune protection of these vaccines against pulmonary plague is not ideal. Based on F1 and V antigens, Adding other multi-subunit vaccines with immuno-protective components will be a direction of future plague vaccine research. The study of serum antibody spectrum in infected patients and immunized animals will provide a better understanding of the pathogenic mechanism of plague. Protein chip technology, developed in recent years, is a high-throughput technology that can simultaneously study multiple antigen-antibody, protein-protein interactions, which has a large scale and high throughput. Few samples are needed. Methods A total of 202 Yersinia pestis virulence related protein genes and expression vectors (pET32a) were selected and expressed in E. coli BL21DE3. The amino terminal of the expressed target protein was labeled with 6 脳 His to be compatible with Ni-NTA. The purified protein was purified by high throughput with 96 well plate. The protein chip was prepared on the aldehydated glass slide. The rabbit serum was immunized with the serum of Yersinia pestis EV76 vaccine strain, the rabbit serum infected with Yersinia pestis and the serum of the natural foci of yellow rat. The types and trends of antibody elevation in different serum were detected. Results A total of 15 proteins were detected in all of the sera infected with Yersinia pestis from different sources. Among them, YPMT1.84mYPMT1.24cPMT1.48cPMT1.48cHN YPCD1.31cHYPCD1.32cPD1.26cYPCD1.26cYPCD1.06cD1.06cPPO1303nYPO2118YPO3319 YPO2113An YPO2090YPO2394 increased significantly and lasted for a long time. These proteins can be used as the focus of the next stage of plague vaccine research and study their protection. In addition to the proteins that are elevated in all serum antibody profiles, there is a specific antibody elevation protein in each serum antibody profile. These proteins may be related to the pathogenicity of Yersinia pestis in the organism. The analysis of antibody profiles under different infection states will provide clues for a deeper understanding of the pathogenic mechanism of Yersinia pestis.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

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本文編號：1607904