本文選題：HIV-1　切入點：vpr　出處：《暨南大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的： 研究HIV-1 vpr基因編碼的病毒蛋白R(Viral protein R，Vpr)對CD4~+T淋巴細胞系C8166生物學行為的影響，為進一步了解Vpr的功能和作用機制，及今后研究Vpr引起整個CD4~+T淋巴細胞蛋白組的漂移奠定基礎。 方法： 通過同源重組構建重組腺病毒質粒，用脂質體法將重組質粒轉染至包裝細胞HEK293，獲得重組腺病毒Ad-vpr，熒光顯微鏡觀察Ad-vpr感染C8166細胞，Westernblotting鑒定Vpr在Ad-vpr感染的C8166細胞內的特異性表達，流式細胞術等檢測Vpr對C8166細胞的細胞膜完整性，，細胞周期，凋亡等生物學行為的影響。透射電鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察Vpr誘導的C8166細胞形態(tài)的改變。 結果： 構建了重組腺病毒Ad-vpr，證實了Vpr在Ad-vpr感染的C8166細胞內的表達，Annexin V-APC染色流式細胞術分析結果表明；Ad-vpr感染48h后C8166細胞GFP~+細胞早期凋亡率與重組空載體感染組(Ad-vector組)相比無明顯差別；而Ad-vpr感染72h后，C8166 GFP~+細胞早期凋亡率顯著高于Ad-vector組。PI染色流式細胞術檢測膜完整性表明：Ad-vpr感染48h的C8166細胞與Ad-vector感染48h的C8166細胞相比，細胞膜完整性明顯不能維持。PI染色流式細胞術檢測細胞周期結果顯示，培養(yǎng)48h的C8166細胞，Ad-vpr感染組晚期凋亡率及S期細胞百分數(shù)顯著高于Ad-vector組，而
[Abstract]:Objective:. To study the effect of HIV-1 vpr gene encoded virus protein rvpr) on the biological behavior of CD4T lymphocyte line C8166, and to lay a foundation for further understanding the function and mechanism of Vpr and for studying the drift of whole CD4T lymphocyte protein group induced by Vpr in the future. Methods:. The recombinant adenovirus plasmid was constructed by homologous recombination and transfected into the packaging cell line HEK293 by liposome method. The recombinant adenovirus Ad-vpra was obtained. The specific expression of Vpr in Ad-vpr infected C8166 cells was identified by Western blotting with fluorescence microscope. The effects of Vpr on cell membrane integrity, cell cycle and apoptosis of C8166 cells were detected by flow cytometry. The morphological changes of C8166 cells induced by Vpr were observed by transmission electron microscope and confocal laser microscope. Results:. The recombinant adenovirus Ad-vpr1 was constructed, and the expression of Vpr in Ad-vpr infected C8166 cells was confirmed by flow cytometry. The results of flow cytometry showed that the early apoptosis rate of C8166 cells infected by Ad-vpr was not significantly different from that of Ad-vector infected C8166 cells. However, the early apoptosis rate of C8166 GFP~ ~ cells infected with Ad-vpr was significantly higher than that of C8166 cells infected with Ad-vector for 48 h after infection with Ad-vector. The membrane integrity of C8166 cells infected with Ad-vpr was significantly higher than that of C8166 cells infected with Ad-vector for 48 h. The results of cell cycle analysis by flow cytometry showed that the late apoptosis rate and S phase percentage of C8166 cells infected with Ad-VPR for 48 h were significantly higher than those in Ad-vector group.
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R346

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本文編號：1600125