本文關鍵詞： 骨髓間充質干細胞 神經(jīng)元樣細胞 膽堿能神經(jīng)元樣細胞 分化　出處：《南昌大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目的探討人骨髓間充質干細胞(BMMSCs)的體外分離、純化、擴增和向膽堿能神經(jīng)元樣細胞的定向分化潛能,以期為BMMSCs的神經(jīng)移植提供理論依據(jù)。 方法應用密度梯度離心法體外分離出BMMSCs,在含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)擴增和傳代,用流式細胞儀檢測BMMSCs的表面標志。利用擴增后的第二代BMMSCs進行誘導分化,分為實驗組和對照組。實驗組的細胞先用含40mg/L WHI-P131的完全培養(yǎng)基預處理48小時后,在含10ng/ml重組人堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的完全培養(yǎng)基中預誘導24小時,最后以含1μmol/L全反式維甲酸(ATRA)和10ng/ml音速波狀蛋白(Shh)的完全培養(yǎng)基誘導5小時;對照組不加任何誘導劑。誘導過程中在相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化,然后進行神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)、神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)和乙酰膽堿轉移酶(ChAT)等神經(jīng)細胞特異性標志的免疫細胞化學染色,并分別計算陽性細胞百分率。 結果分離擴增后的BMMSCs強表達CD29;較強表達CD44、CD166和CD105;不表達CD45、CD34和HLA-DR。實驗組BMMSCs經(jīng)誘導后均能分化為具有典型神經(jīng)元形態(tài)的細胞,并表達NSE(61.00±3.63)%、GFAP(14.42±2.74)%;且相當部分神經(jīng)元樣細胞表達ChAT(9.92±1.29)%。對照組BMMSCs細胞形態(tài)無明顯變化,且上述特異性標志物表達均為陰性。 結論BMMSCs可跨胚層分化為神經(jīng)元樣細胞和膽堿能神經(jīng)元樣細胞。
[Abstract]:Objective to investigate the potential of human bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) in isolation, purification, expansion and differentiation potential to cholinergic neuron like cells in vitro, so as to provide a theoretical basis for BMMSCs neural transplantation.
Methods using density gradient centrifugation in vitro isolated BMMSCs culture medium containing 10%FBS DMEM/F12 (complete medium) amplification and passages, with the surface markers of BMMSCs by flow cytometry. The differentiation of the amplification of the second generation of BMMSCs, divided into experimental group and control group. The experimental group cells with 40mg/L WHI-P131 complete medium pretreatment after 48 hours in 10ng/ml containing recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) in complete medium pre induced for 24 hours, finally with 1 mol/L of all trans retinoic acid (ATRA) and 10ng/ml protein (Shh) of the sonic wave induced by complete medium 5 h; the control group without any inducer. Induction of cell morphological changes were observed under phase contrast microscope and neuron specific enolase (NSE), glial fibrillary acidic protein (GFAP) and choline acetyltransferase (ChAT) nerve Immunocytochemical staining of cell specific markers, and the percentage of positive cells were calculated respectively.
The separation of amplified BMMSCs strong expression of CD29; strong expression of CD44, CD166 and CD105; the expression of CD45 CD34 and HLA-DR. BMMSCs in the experimental group after induction can differentiate into typical neuronal morphology of cells, and the expression of NSE (61 + 3.63)%, GFAP (14.42 + 2.74)%; and a considerable part of neurons the expression of ChAT like cells (9.92 + 1.29)%. The control group of BMMSCs cells had no significant morphological changes, and the specific markers were negative.
Conclusion BMMSCs can differentiate into neuron like and cholinergic neuron like cells.

【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R329

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 ;骨髓間充質干細胞與肝細胞修復及組織重構[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年23期

2 林治平;曾榮;胡資兵;林顥;;Wnt信號通路與骨髓間充質干細胞神經(jīng)分化[J];廣東醫(yī)學;2011年08期

3 王長軍;殷國勇;李翔;沈國強;;骨髓間充質干細胞與成骨細胞復合培養(yǎng)對成骨細胞增殖的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2011年11期

4 張英博;楊大平;;干細胞用于創(chuàng)傷修復的新進展[J];中國美容醫(yī)學;2011年08期

5 石洋;袁偉;;中藥誘導骨髓間充質干細胞分化為成骨細胞的研究進展[J];內蒙古中醫(yī)藥;2010年05期

6 羅俊;顧文娟;徐禮;李江;;骨髓間充質干細胞移植治療對心肌梗死后心功能的影響[J];醫(yī)學與哲學(臨床決策論壇版);2011年06期

7 劉嘉祺;林峰;李孟全;;骨髓間充質干細胞的培養(yǎng)及生物學特性[J];牡丹江醫(yī)學院學報;2011年03期

8 劉偉;趙勁民;蘇偉;李曉峰;秦義武;;柚皮苷對兔骨髓間充質干細胞分化為成骨細胞的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2011年14期

9 程書榜;王成友;洪建琴;范子冰;胡迎春;;同種骨髓間充質干細胞靜脈輸注對大鼠CD4~+、CD8~+T淋巴細胞和IL-10、IL-2、TNF-α的影響[J];消化腫瘤雜志(電子版);2010年01期

10 李軍;杜金榮;戴艷萍;;骨髓間充質干細胞移植治療大鼠腦梗死的研究[J];黑龍江醫(yī)學;2011年09期

相關會議論文 前10條

1 劉昱;宋健;陳錫昌;胡成俊;劉維新;;體外“心肌環(huán)境”誘導大鼠骨髓間充質干細胞分化的研究[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

2 馮凱;陳健琳;烏仁娜;徐晨;李欲航;陳虎;;骨髓間充質干細胞抑制異體T細胞反應的實驗研究[A];第三屆全國血液免疫學學術大會論文集[C];2003年

3 宮立眾;夏順中;張翼軍;張紅賓;史曦凱;鐘大平;裴莉;張勇;;骨髓間充質干細胞中大小兩群細胞的生物學特性比較[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

4 徐衛(wèi);李建勇;朱光榮;費曉明;孟麗娟;周小玉;汪承亞;;骨髓間充質干細胞體外培養(yǎng)的臨床研究[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

5 孫樹津;后曉南;胡江;龍勉;陶祖萊;;模擬微重力條件下骨髓間充質干細胞的培養(yǎng)[A];中國空間科學學會空間生命專業(yè)委員會2003年中國空間生命科學與航天醫(yī)學會議論文摘要集[C];2003年

6 劉昱;宋健;陳錫昌;胡成俊;劉維新;;5-氮胞苷誘導大鼠骨髓間充質干細胞體外分化的研究[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

7 樓曉;陳虎;江飛子;馮凱;江岷;胡亮釘;徐晨;李欲航;李渤濤;俞志勇;;骨髓間充質干細胞支持造血重建的研究[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

8 孫樹津;后曉南;龍勉;陶祖萊;;力學環(huán)境因素與骨髓間充質干細胞的增殖與分化[A];第七屆全國生物力學學術會議論文集[C];2003年

9 張偉;葛薇;李長虹;韓欽;鄧為民;尤勝國;趙春華;;骨髓間充質干細胞對單核細胞來源的樹突狀細胞分化、成熟和功能的影響[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

10 李艷華;張銳;秦立蓬;趙連旭;王蘊芳;岳文;裴雪濤;;重組腺病毒載體pAd-pdx-1的構建及其在骨髓間充質干細胞中的表達[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

相關重要報紙文章 前4條

1 趙煒;骨髓間充質干細胞可減輕排異反應[N];健康報;2004年

2 本報記者 吳潔;為實現(xiàn)“人體配件工廠”的夢想[N];科技日報;2002年

3 記者　秦軍　;“萬能細胞”巧治心臟病[N];浙江日報;2004年

4 本報記者 張曄;骨髓干細胞移植治心梗成功[N];科技日報;2003年

相關博士學位論文 前10條

1 李海生;低氧促進人骨髓間充質干細胞增殖和分化及其機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2005年

2 史達;木豆葉聯(lián)合骨髓間充質干細胞治療股骨頭壞死的實驗與相關臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2007年

3 顧紹峰;兔骨髓間充質干細胞分化為角膜上皮樣細胞的體外研究[D];中國醫(yī)科大學;2008年

4 張偉;骨髓間充質干細胞免疫調節(jié)機制的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2004年

5 張海峰;骨髓間充質干細胞移植對大鼠急性肝功能衰竭治療作用的實驗研究[D];山東大學;2007年

6 牟大鵬;抑制消減雜交技術篩選骨髓間充質干細胞誘導分化前后差異表達基因[D];吉林大學;2007年

7 景紅;大鼠骨髓間充質干細胞體外誘導為腎臟系膜細胞樣細胞的實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

8 宋可新;黑色素細胞與骨髓間充質干細胞復合構建組織工程皮膚的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

9 滕春燕;骨髓間充質干細胞對急性胰腺炎損傷修復及其機制的實驗研究[D];吉林大學;2009年

10 任曉勇;人生長分化因子-5基因轉染骨髓間充質干細胞及用于軟骨缺損修復的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學;2005年

相關碩士學位論文 前10條

1 項正兵;人骨髓間充質干細胞向膽堿能神經(jīng)元樣細胞定向分化的實驗研究[D];南昌大學;2007年

2 陳書尚;骨髓間充質干細胞移植治療心力衰竭的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2005年

3 劉宏志;大鼠骨髓間充質干細胞體外誘導分化為神經(jīng)前體細胞的研究[D];中國醫(yī)科大學;2005年

4 王艷芳;生物反應器內培養(yǎng)兔骨髓間充質干細胞[D];大連理工大學;2006年

5 陳潔;同種異體移植骨髓間充質干細胞治療大鼠心梗后心室重構[D];浙江大學;2006年

6 劉弘光;嘗試移植骨髓間充質干細胞治療大鼠糖尿病[D];中國醫(yī)科大學;2006年

7 董玉泉;兔骨髓間充質干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及生物學特性研究[D];青島大學;2006年

8 周哲;骨髓間充質干細胞bFGF復合降解膜修復皮膚缺損的研究[D];吉林大學;2008年

9 賈小力;骨髓間充質干細胞靜脈移植對損傷大鼠脊髓VEGF、bFGF表達及血管新生的影響[D];福建醫(yī)科大學;2008年

10 劉書會;局部應用血管內皮生長因子及間充質干細胞培養(yǎng)物提高皮瓣成活率的實驗性研究[D];吉林大學;2009年

，

本文編號：1536076