本文關鍵詞： 兩種 Flavonoids 氧化 應激 條件下 阻力 血管 保護 作用 機制 研究　出處：《浙江大學》2007年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目的：(1)研究超氧陰離子(Superoxide anion，O_2~-)對大鼠腸系膜阻力血管內皮細胞超極化因子(endothelium derived hyperpolarizing factor，EDHF)和一氧化氮(nitric oxide，NO)引起的血管舒張功能的影響及其可能機制；(2)探討杭白菊總黃酮及其有效成分木犀草素和芹菜素的阻力血管舒張功能保護作用并研究相關機制。 方法：(1)阻力血管張力測定：雄性Sprague-Dawley大鼠，體視顯微鏡下取腸系膜血管三級分支約2mm長血管環(huán)，置于DMT 610 M系統(tǒng)中37℃生理鹽溶液(PSS)恒溫灌流，持續(xù)通以95％O_2和5％CO_2的混合氣，并通過PowerLab生物信號采集系統(tǒng)記錄張力變化。血管環(huán)浴液中加入焦酚(O_2~-的供體)建立O_2~-損傷模型，，檢測在阻力血管中O_2~-對其內皮依賴性和非依賴性舒張反應的影響； (2)腸系膜血管床灌注壓測定：迅速取出腸系膜血管床并置于PSS液中，在靠近盲腸端結扎，在十二指腸處分離腸系膜動、靜脈，靜脈處結扎并在動脈處插管，同時將血管床從腸管分離；37℃并持續(xù)通以95％O_2和5％CO_2混合氣的PSS液用蠕動泵以5mL/min的速度恒溫灌流血管床；血管反應以灌注壓改變計量；60min穩(wěn)定后，將灌流系統(tǒng)形成一個循環(huán)的系統(tǒng)，總容積為50mL；以1μM苯腎上腺素(PE)灌流血管床，形成的灌注壓一般在120-130mmHg，待穩(wěn)定后加入1μM乙酰膽堿(ACh)檢驗血管床內皮完整性； (3)阻力血管平滑肌細胞膜電位測定：待血管穩(wěn)定后，膜電位應用細胞內微電極的方法記錄。玻璃微電極內充3M KCl溶液，電極電阻50-80兆歐，參考電極為銀絲制作的Ag-AgCl電極。膜電位引出后經(jīng)微電極放大器同步顯示記錄。借助于解剖顯微鏡，用微電極推進器將電極由血管外膜面插入，在細胞內至少穩(wěn)定15s后開始觀察。判斷電極插入細胞的指標是：①記錄曲線由零電位驟然下降超過—40mV，且穩(wěn)定于此水平；②電極由細胞內提出后，記錄曲線迅速恢復到插入前的水平； (4)血管切片超氧陰離子含量測定：用冰凍切片機將血管切成約30μm厚的血管薄片，并用超氧陰離子熒光標記物DHE標記，利用熒光顯微鏡觀察熒光強度變化；胞質中DHE可呈現(xiàn)藍色熒光，被過氧化物氧化后進入細胞DNA呈現(xiàn)紅色熒光(激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長610nm)。血管薄片在37℃PSS緩沖液中穩(wěn)定30min，然后加入含有DHE(2μM)的緩沖液，蓋上蓋玻片在37℃的暗室中孵育30min，然后放置于熒光顯微鏡上觀察熒光強度變化。 結果：焦酚(10，100，300和1000μM)可濃度依賴性地引起ACh誘導的腸系膜阻力血管舒張功能減弱；其中，300μM焦酚顯著減弱腸系膜血管環(huán)由ACh誘導的EDHF和NO介導的內皮依賴性血管舒張效應，但對硝普鈉和吡那地爾引起的內皮非依賴性的血管舒張作用無明顯影響；同時300μM焦酚顯著減弱了ACh誘導的超極化。給予杭白菊總黃酮灌胃可以減弱焦酚對血管床灌注壓的降低；木犀草素和芹菜素明顯減弱焦酚對腸系膜阻力血管舒張和超極化的損傷；血管環(huán)超氧陰離子含量測定進一步證明木犀草素和芹菜素可以降低血管環(huán)氧化應激狀態(tài)下的超氧陰離子含量。 結論：O_2~-濃度依賴性地引起ACh誘導的大鼠腸系膜阻力血管內皮依賴性舒張效應和超極化減弱，提示O_2~-可抑制阻力血管內皮依賴性舒張反應；其機制可能是O_2~-抑制了阻力血管內皮細胞EDHF和NO的作用，繼而抑制了內皮依賴性血管舒張功能。木犀草素和芹菜素可以明顯減弱焦酚對腸系膜阻力血管舒張和超極化的損傷，其機制可能是直接減弱了超氧陰離子含量，這將對氧化應激相關的血管疾病有著重要意義。
[Abstract]:Objective : ( 1 ) To study the effects of superoxide anion ( O _ 2 ~ - ) on the endothelium derived hyperpolarizing factor ( EDHF ) and nitric oxide ( NO ) in rat mesenteric resistance vascular endothelial cells and its possible mechanism ; ( 2 ) To explore the protective effects of total flavonoids and their effective components on resistance to vasodilatation in rats and to study the mechanism . Methods : ( 1 ) Measurement of resistance blood vessel tension : Male Sprague - Dawley rats were examined by stereomicroscope at 37 鈩

本文編號：1514019