本文關(guān)鍵詞： 內(nèi)皮祖細(xì)胞 內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因 一氧化氮 氧自由基　出處：《廣東醫(yī)學(xué)》2014年22期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的探討利用脂質(zhì)體介導(dǎo)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因體外轉(zhuǎn)染小鼠骨髓來(lái)源的內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)的可行性。方法密度梯度離心法分離ICR小鼠骨髓來(lái)源單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)制備小鼠EPC并鑒定;構(gòu)建、擴(kuò)增、提取并純化pcDNA3.0/eNOS基因質(zhì)粒;用EPC培養(yǎng)基配成2×105·mL-1細(xì)胞懸液,按0.6 mL/孔重新鋪6孔板,待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%左右融合時(shí),用脂質(zhì)體LipofectamineTM2000體外轉(zhuǎn)染eNOS基因至EPC。轉(zhuǎn)染48 h后,采用RT-PCR檢測(cè)EPC中eNOS的表達(dá),硝酸還原酶法檢測(cè)EPC中一氧化氮(NO)的含量,熒光探針DCFH-DA活性氧檢測(cè)氧自由基(ROS)的含量。結(jié)果成功培養(yǎng)EPC,成功構(gòu)建pcDNA3.0/eNOS基因載體。轉(zhuǎn)染48 h后,EPC中eNOS表達(dá)量明增加(P0.01),NO含量明顯升高(P0.01),ROS含量明顯降低。結(jié)論脂質(zhì)體介導(dǎo)eNOS基因能夠有效轉(zhuǎn)染小鼠EPC,并能在EPC中有效表達(dá)。
[Abstract]:Objective to investigate the feasibility of transfection of endothelial nitric oxide synthase (Enos) gene into murine bone marrow-derived endothelial progenitor cells (EPCs) by liposome in vitro. Methods Mononuclear cells derived from bone marrow of ICR mice were isolated by density gradient centrifugation. Mouse EPC was prepared and identified. The plasmid of pcDNA3.0/eNOS gene was constructed, amplified, extracted and purified, the suspension of 2 脳 10 5 路mL-1 cells was prepared by EPC medium, and the 6 well plate was re-laid according to 0.6 mL / well. When the cell grew to about 80%, the eNOS gene was transfected into EPCs by liposome LipofectamineTM2000 in vitro. After 48 h of transfection, RT-PCR was used to detect the expression of eNOS in EPC, and nitrate reductase method was used to detect the content of nitric oxide (no) in EPC. Results the pcDNA3.0/eNOS gene vector was successfully cultured and constructed successfully. After 48 h of transfection, the expression of eNOS in EPC was increased significantly, and the content of P0.01N was significantly increased. Conclusion Liposome can significantly decrease the content of Ros. ENOS gene can be effectively transfected into mouse EPCs and expressed in EPC.
【作者單位】： 江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院普外科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81070287) 江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):BK2011484) 江蘇省博士后科研資助計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):1302096B)
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1495230