本文關鍵詞： 幽門螺桿菌 表位 尿素酶 粘附素 工程菌　出處：《四川大學學報(醫(yī)學版)》2014年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構建含有幽門螺桿菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表達質粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相應的原核表達工程菌,研究其表達特性。方法通過生物信息學方法從ureI、ureB和hpaA基因中篩選T細胞和B細胞優(yōu)勢表位基因序列,人工合成并構建原核重組表達質粒pET28a(+)/IBA。經限制性內切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鑒定及DNA測序鑒定后導入大腸桿菌BL21(DE3)。該工程菌經IPTG誘導后,用SDS-PAGE檢測重組蛋白(rIBA)的表達情況,以抗幽門螺桿菌悉尼株(SS1株)特異卵黃抗體采用Western blot檢測rIBA的抗原性。結果構建的多表位原核表達質粒pET28a(+)/IBA雙酶切和測序鑒定與設計序列100%一致。工程菌經IPTG誘導后SDS-PAGE電泳顯示在相對分子質量40×103左右有一條明顯蛋白條帶,Western blot顯示有相應位置特異反應條帶。結論成功構建幽門螺桿菌多表位重組原核表達質粒pET28a(+)/IBA及相應原核表達工程菌,該工程菌表達的rIBA具有抗原性,表明該重組蛋白與幽門螺桿菌有高度相關性。
[Abstract]:Objective to construct UreI containing Helicobacter pylori urease. Prokaryotic expression plasmid pET28a of UreB and HpaA. And the corresponding prokaryotic expression engineering bacteria. Methods T cell and B cell dominant epitope gene sequences were screened from ureIureB and hpaA genes by bioinformatics. The prokaryotic recombinant expression plasmid pET28a was synthesized and constructed. Xho 鈪，

本文編號：1479552