本文關(guān)鍵詞： 骨髓 間質(zhì)干細胞 慢病毒屬 受體 CXCR 干細胞 骨髓干細胞 慢病毒 骨髓間充質(zhì)干細胞 CXCR 細胞增殖 免疫調(diào)節(jié)因子 遼寧省自然科學基金　出處：《中國組織工程研究》2014年41期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：背景:間充質(zhì)干細胞在體內(nèi)歸巢主要調(diào)控因子是CXCR4,如何提高干細胞自身CXCR4的表達量是調(diào)節(jié)干細胞體內(nèi)靶器官歸巢能力的關(guān)鍵。目的:構(gòu)建CXCR4或GFP基因慢病毒表達載體,并觀察其對骨髓間充質(zhì)干細胞自身生長特性及分泌功能的影響。方法:骨髓間充質(zhì)干細胞應(yīng)用慢病毒載體轉(zhuǎn)染系統(tǒng)轉(zhuǎn)染CXCR4基因達到過表達,同時單獨轉(zhuǎn)GFP基因作為對照。通過熒光顯微鏡、RT-PCR、免疫蛋白印跡方法驗證病毒轉(zhuǎn)染效率;流式細胞技術(shù)測定骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖、凋亡情況;Western Blot法測定間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基上清中分泌蛋白及細胞因子變化。結(jié)果與結(jié)論:慢病毒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)可以安全、有效地轉(zhuǎn)染CXCR4基因或GFP基因到骨髓間充質(zhì)干細胞。流式細胞儀檢測顯示過表達CXCR4的骨髓間充質(zhì)干細胞增殖能力、生存能力加強,凋亡細胞減少(P0.05);細胞上清蛋白分析提示過表達CXCR4后,骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)上清內(nèi)出現(xiàn)很多的蛋白因子升高(P0.05),其中大多數(shù)對細胞自身復制及免疫調(diào)節(jié)有益。結(jié)果表明慢病毒轉(zhuǎn)染是一種安全高效的基因修飾手段,可以通過CXCR4基因修飾的方法提高骨髓間充質(zhì)干細胞的生存能力、降低凋亡率,調(diào)節(jié)細胞保護性因子及免疫調(diào)節(jié)因子的分泌功能。
[Abstract]:Background: the main regulatory factor for homing of mesenchymal stem cells in vivo is CXCR4. How to improve the expression of stem cells CXCR4 is the key to regulate the homing ability of target organs in stem cells. Objective: to construct the lentivirus expression vector of CXCR4 or GFP gene. Methods: bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were transfected with lentivirus vector transfection system to achieve overexpression of CXCR4 gene. At the same time, the GFP gene was transferred alone as control. The transfection efficiency was verified by fluorescence microscope and Western blot. The proliferation and apoptosis of bone marrow mesenchymal stem cells were measured by flow cytometry. The secretory protein and cytokines in the supernatant of mesenchymal stem cell medium were determined by Western Blot. Results & conclusion: lentivirus transfection system is safe. CXCR4 gene or GFP gene was effectively transfected into bone marrow mesenchymal stem cells. Flow cytometry showed the proliferation ability and survival ability of bone marrow mesenchymal stem cells expressing CXCR4. Apoptotic cells decreased P0.05A; The analysis of superalbumin showed that after overexpression of CXCR4, there were a lot of protein factors in the supernatant of bone marrow mesenchymal stem cells (P0.05). The results showed that lentivirus transfection was a safe and efficient method for gene modification. CXCR4 gene modification can improve the viability of bone marrow mesenchymal stem cells, reduce apoptosis rate and regulate the secretion of protective and immunomodulatory factors.
【作者單位】： 解放軍沈陽軍區(qū)總醫(yī)院泌尿男科;
【基金】：遼寧省自然科學基金項目(2013020199)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 文章亮點:1細胞上清分泌蛋白是干細胞在體內(nèi)修復組織損傷、調(diào)節(jié)免疫功能的主要手段。研究提示轉(zhuǎn)染CXCR4的骨髓間充質(zhì)干細胞可以分泌更多的免疫調(diào)節(jié)蛋白,對治療免疫性疾病有重要意義。2轉(zhuǎn)染CXCR4的骨髓間充質(zhì)干細胞凋亡率下降、細胞多處于增殖期,提示過表達CXCR4的間充質(zhì)干細胞

【參考文獻】

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本文編號：1476432