本文關鍵詞： 骨髓間充質(zhì)干細胞 細胞培養(yǎng) 成骨誘導　出處：《山東大學》2005年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:本實驗從骨髓中分離間充質(zhì)干細胞(MSCs)體外擴增培養(yǎng),觀察MSCs的形態(tài),檢測不同因素對MSCs生長的影響,測定生長曲線。并體外誘導MSCs向成骨細胞方向分化,檢測成骨特有的骨鈣素及Ⅰ型膠原的表達,從而了解MSCs的生物學形狀,探索MSCs的生長條件。 方法:抽取兔髂骨骨髓,利用Percoll分離液(1.073g/ml)進行密度梯度離心法從骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細胞,體外培養(yǎng)擴增,觀察其形態(tài)學變化,測定MSC的生長動力學及對MSC生長的影響因素的分析,了解MSCs的生物學性狀,研究MSCs的體外生長規(guī)律。 同時體外分離誘導培養(yǎng)MSCs向成骨細胞分化(培養(yǎng)液中加入地塞米松終濃度為10~(-8)mol/L-、β—甘油磷酸鈉為10mmol/L、維生素C為50μg/mL),通過檢測堿性磷酸酶表達,Ⅰ型膠原分泌,骨鈣素生成對其體外誘導成骨能力進行定性檢測和觀察,研究細胞生物學特性及其體外成骨能力。 結(jié)果:1、分離獲取了較高純度的MSCs,保持了細胞的活性。Percoll分離液(1.073g/ml)分離的骨髓單個核細胞24小時后貼壁,細胞呈圓形,48—72小時后呈紡錘形,梭形,增值迅速,原代培養(yǎng)月10—14天左右可以達到80—90%融合,傳代細胞24小時完全貼壁,5—7天達到80—90%融合,可傳代至10代以上,經(jīng)傳代后細胞增值能力有所下降,MSCs細胞逐漸出現(xiàn)衰老現(xiàn)象。細胞老化的表現(xiàn)為:細胞生長速度緩慢。細胞胞漿中出現(xiàn)多量空泡及顆粒樣物質(zhì),細胞碎片的增多。在該培養(yǎng)條件下,原代
[Abstract]:Objective: to investigate the effects of different factors on the growth of mesenchymal stem cells (MSCs) in vitro, to observe the morphology of MSCs and to investigate the effect of different factors on the growth of MSCs. The growth curve was measured and MSCs was induced to differentiate into osteoblasts in vitro. The expression of osteocalcin and type I collagen was detected in order to understand the biological shape of MSCs. To explore the growth conditions of MSCs. Methods: rabbit iliac bone marrow was extracted. Bone marrow mesenchymal stem cells were isolated from bone marrow by density gradient centrifugation with Percoll (1.073 g / ml) and cultured in vitro. The morphological changes were observed, the growth kinetics of MSC and the influencing factors on the growth of MSC were analyzed, the biological characters of MSCs were understood, and the rule of MSCs growth in vitro was studied. At the same time, the differentiation of MSCs into osteoblasts was induced in vitro (the final concentration of dexamethasone was 10 ~ 8mol / L ~ (-)). 尾 -glycerophosphate was 10 mmol / L, vitamin C was 50 渭 g / mL. Type I collagen was secreted by detecting the expression of alkaline phosphatase. Osteocalcin production was used to detect and observe the osteogenic ability of osteoblasts in vitro and to study the biological characteristics and osteogenic ability of osteoblasts in vitro. Results: 1, high purity MSCs was obtained. The bone marrow mononuclear cells were adherent to the wall after 24 hours, and the cells were fusiform and fusiform after 48-72 hours. The primary culture could reach 80-90% fusion in 10-14 days, and 80-90% fusion could be achieved on 5-7 days after 24 hours of passage, and it could be subcultured to more than 10 generations. After passage, the proliferation ability of MSCs cells decreased gradually. The aging of MSCs cells showed that the growth rate of cells was slow, and a lot of vacuoles and granular-like substances appeared in the cytoplasm of MSCs cells. The increase of cell fragments. In this culture condition, the primary culture
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R329.2

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本文編號：1450154