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活細胞內脊髓灰質炎病毒復制復合體蛋白相互作用研究

發(fā)布時間:2018-01-12 22:25

  本文關鍵詞:活細胞內脊髓灰質炎病毒復制復合體蛋白相互作用研究 出處:《中國科學院研究生院(武漢病毒研究所)》2007年碩士論文 論文類型:學位論文


  更多相關文章: 活細胞 脊髓灰質炎病毒 復制復合體 熒光共振能量轉移 蛋白質相互作用 蛋白3AB、VPg、3D


【摘要】: 脊髓灰質炎病毒為單股正鏈RNA病毒。當病毒基因組RNA進入寄主細胞質后,可直接翻譯出大分子的多聚蛋白肽,并迅速被水解加工為次級前體P1,P2和P3,然后三個次級前體分別進一步分級剪切成多種具有重要功能的終末產物蛋白。一些病毒蛋白和宿主蛋白以及病毒的RNA一起組成病毒復制復合體,高效迅速地指導病毒核酸的合成。其中P3的剪切產物3AB,3B(VPg),3D等在病毒的復制復合體的組成及功能行使中具有重要作用:3B(VPg)共價結合于RNA新生鏈的5’端,起RNA合成起始引發(fā)作用;3D是延長RNA新生鏈的聚合酶;3AB是膜結合蛋白,幫助病毒復制復合體定位于細胞內膜上。 研究脊髓灰質炎病毒復制復合體內關鍵蛋白間相互作用,闡明病毒復制復合體的作用機制,對揭示病毒復制機理以及理解病毒與寄主細胞間相互作用具有重要意義。迄今為止,已經發(fā)展了許多蛋白質相互作用的研究方法如:酵母雙雜交、免疫共沉淀、SPR等。但這些方法都無法實現蛋白質相互作用的原位、活體、實時研究。熒光共振能量轉移技術是一種在活細胞內研究蛋白質相互作用的新技術,可以在活體內原位、無損地可視化蛋白-蛋白間相互作用。本研究利用熒光共振能量轉移技術,首次在活細胞內可視化研究了脊髓灰質炎病毒復制復合體內關鍵蛋白質間的相互作用。 本論文主要研究了脊髓灰質炎病毒復制復合體內三種關鍵蛋白質3AB、VPg、3D在活細胞內的定位和相互作用情況。利用激光共聚焦顯微鏡和FRET技術分析樣品。單獨轉染實驗顯示:3AB蛋白主要分布在細胞質區(qū)域,且聚集成小的不規(guī)則的顆粒;而VPg和3D蛋白主要均勻分布于全細胞。蛋白的共轉染實驗顯示:3AB-VPg這組蛋白在活細胞中可相互作用,且作用區(qū)域集中在細胞質,分析結果顯示FRET效率平均值為8.3±0.6%(n=44);同時3AB-3D這組蛋白在活細胞中也可相互作用,且作用區(qū)域集中在細胞質,分析結果顯示FRET效率平均值為6.1±0.8%(n=46);而VPg-3D這組蛋白在活細胞中雖然可觀察到明顯的相互作用,但作用區(qū)域分散在整個細胞,沒有特別集中的區(qū)域,分析結果顯示FRET效率平均值為6.8±0.5%(n=51)?梢娪3AB蛋白參與的兩組相互作用區(qū)域集中在細胞質區(qū)域,與病毒復制復合體產生位置類似。此外,通過脊髓灰質炎病毒的感染實驗,我們發(fā)現病毒的感染對3AB-VPg、3AB-3D這兩組蛋白間相互作用無明顯影響,但是卻加強了蛋白VPg和3D間的相互作用,使FRET效率的平均值從6.8±0.5%(n=51)上升為11.1±1.1%(n=43)。 借助熒光蛋白標記和熒光共振能量轉移技術,本論文研究了脊髓灰質炎病毒復制復合體內三種關鍵蛋白質3AB、VPg、3D在活細胞內的定位和相互作用。活細胞內蛋白質3AB、VPg、3D相互作用的研究結果證明了它們在脊髓灰質炎病毒的復制復合體形成中的重要作用,,為深入認識病毒復制復合體的形成和作用機制,闡明病毒復制機理提供了重要的數據資料。
[Abstract]:When the viral genome RNA enters the host cytoplasm , the multimeric peptide of the macromolecule can be directly translated , and the three sub - precursors are rapidly hydrolyzed into a plurality of terminal product proteins with important functions . The three sub - precursors are further fractionated and cut into a plurality of terminal product proteins with important functions . In order to clarify the mechanism of interaction between proteins and to understand the mechanism of viral replication and to understand the interaction between viruses and host cells , it is important to study the mechanism of viral replication and to understand the interaction between proteins and host cells . In this paper , the localization and interaction of three key proteins 3AB , VPg and 3D in living cells were studied . In this paper , the localization and interaction of three key proteins 3AB , VPg and 3D in living cells were studied by means of fluorescent protein labeling and fluorescence resonance energy transfer technique .

【學位授予單位】:中國科學院研究生院(武漢病毒研究所)
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2007
【分類號】:R373

【共引文獻】

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本文編號:1416258

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